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文檔簡介
1、DNA加合物是致癌物或其代謝產(chǎn)物與DNA分子的親核位點形成的共價結(jié)合物,是一種重要的暴露標(biāo)志物.DNA加合物的形成代表著化學(xué)致癌過程中的一個早期的、可檢測的關(guān)鍵階段.目前DNA加合物的檢測方法主要有:免疫法、熒光法和<'32>P-后標(biāo)記法已及各種色譜方法等,其中<'32>P-后標(biāo)記法由于具有極高的靈敏度(1個加合物/10<'8-10>正常核酸),從而成為目前測定DNA加合物的最主要方法.但<'32>P-后標(biāo)記法及其改進(jìn)法仍然存在許多難以
2、克服的缺點,如放射自顯影中經(jīng)常存在人為干擾斑點,操作步驟繁瑣,放射性同位素對人體有害,而且檢測費用較高.此外方法的特異性和重現(xiàn)性也有待進(jìn)一步提高.該研究的目的是利用化學(xué)發(fā)光技術(shù),建立一種簡便實用的DNA加合物檢測新方法.其基本原理是利用特異的核酸酶水化DNA樣品,加合物最終以二聚核苷酸(XpN)的形式存在,然后在T<,4>多聚核苷酸激酶(PNK)的作用下,將ATP分子的γ位磷酸轉(zhuǎn)移標(biāo)記到XpN的5端,因此樣品中加合物的含量與ATP的消耗
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