bFGF對(duì)糖尿病大鼠心肌缺血-再灌注損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.鑒于缺血/再灌注模型制作的難度大、死亡率高，本實(shí)驗(yàn)采用不同的開(kāi)胸方式結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支(LADCA)，尋求一種相對(duì)更穩(wěn)定可靠的缺血/再灌注模型制作方法。 2.初步觀察bFGF對(duì)糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注的影響及其與對(duì)正常大鼠心肌缺血再灌注作用的差異。 方法： 1.取60只健康雄性SD大鼠，分為3組，每組20只，分別采用第四肋間開(kāi)胸、左胸側(cè)切和胸骨正中切開(kāi)三種不同開(kāi)胸方法建立心肌缺血/再灌注模

2、型(Ischemia/Reperfusion，I/R)。通過(guò)心電圖、心肌梗死面積和死亡率等相關(guān)指標(biāo)的觀察比較，選取一種更好的方法進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。 2.取140只健康雄性SD大鼠，其中80只造糖尿病模型(一次性腹腔注射STZ55mg/kg體重)，糖尿病模型8w再做心肌缺血/再灌注模型，即糖尿病心肌缺血/再灌注；其余60只通過(guò)胸骨正中切開(kāi)結(jié)扎LADCA造模型，即正常大鼠心肌缺血/再灌注。所有I/R模型均通過(guò)心肌內(nèi)注射給等容量bFGF

3、或生理鹽水。制備成功后，隨機(jī)挑選分為四組，即正常鼠I/R+生理鹽水組(Cn組)、正常鼠I/R+bFGF組(Cb組)、糖尿病鼠I/R+生理鹽水組(DN組)、糖尿病鼠I/R+bFGF組(Db組)，每組12只共48只。FR7d后采集標(biāo)本：頸動(dòng)脈取血檢測(cè)MDA和L,DH；取心室作TTC染色觀察梗死面積；石蠟包埋切片作HE染色和免疫組化，觀察心肌組織結(jié)構(gòu)變化和血管生長(zhǎng)(Ⅷ因子免疫組化)以及細(xì)胞凋亡(caspase-3免疫組化)情況。 結(jié)果

4、： 1.心電圖監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，缺血時(shí)ST段抬高。肉眼觀結(jié)扎點(diǎn)以下左心室前壁表面發(fā)紺。 2.本實(shí)驗(yàn)TTC染色可見(jiàn)白色區(qū)域，證明有梗死存在。TTC是一種水溶性鹽類物質(zhì)，它可以與活細(xì)胞線粒體脫氫酶反應(yīng)生成深紅色脂溶性物質(zhì)，死亡細(xì)胞由于線粒體內(nèi)脫氫酶失活而不顯色。即正常組織染成均勻的磚紅色，而梗塞灶呈白色。 3.第四肋間開(kāi)胸、左胸側(cè)切和胸骨正中切開(kāi)三種不同開(kāi)胸方法成功率的比較，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且胸骨正中切開(kāi)成功

5、率最高。 4.剪尾尖取血檢測(cè)空腹血糖≥11.1mmol/L，證實(shí)糖尿病模型成功。 5.MAD含量和LDH活性的測(cè)定，bFGF治療組低于對(duì)照生理鹽水組；糖尿病組高于非糖尿病組。 6.心肌內(nèi)血管數(shù)的觀察，即Ⅷ因子的表達(dá)：bFGF治療組高于對(duì)照生理鹽水組；糖尿病組低于非糖尿病組。 7.細(xì)胞凋亡caspase-3的陽(yáng)性細(xì)胞率(PEI)的檢測(cè)，bFGF治療組低于對(duì)照生理鹽水組：糖尿病組高于非糖尿病組。 結(jié)論