p53及Mettl9在缺氧-復氧C6細胞株的表達研究.pdf

1、目的:本實驗體外培養(yǎng)大鼠膠質瘤(C6)細胞，建立體外缺血及缺血再灌注損傷模型，采用real-time PCR和逆轉錄PCR檢測p53和Mettl9兩種基因在不同時間點的表達。
　　 方法:①體外培養(yǎng)C6細胞，建立體外缺氧缺糖及缺氧缺糖/復氧損傷模型，采用乳酸脫氫酶漏出率測定細胞損傷程度、MTT比色法測定細胞活力和流式細胞術檢測細胞凋亡。②用Real-time PCR和逆轉錄PCR測定p53和Mettl9基因在不同時間點的表達。<

2、br>　　 結果:
　　 1.不同缺氧/復氧時間對細胞LDH漏出率的影響:與正常組比較，缺氧組細胞LDH漏出率明顯升高，具有統(tǒng)計學意義(p＜0.01);與缺氧組相比，缺/復氧組細胞LDH漏出率明顯上升(p＜0.01)。
　　 2.不同缺氧/復氧時間對細胞活力的影響:與正常組比較，缺氧組細胞活力明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（H4、H8、H12組p＜0.01，H24組p＜0.05），在12h細胞活力最低;與缺氧組比，缺/復氧

3、組細胞活力明顯增強(p＜0.01)。
　　 3.不同氧/復氧時間對細胞凋亡率的影響:與正常組比較，缺氧組細胞凋亡明顯增多(p＜0.01)，在缺氧12h處凋亡率達到最大，24h處凋亡率有下降趨勢;與缺氧組比較，缺/復氧組細胞凋亡率明顯上升(p＜0.05)。
　　 4.Real-time PCR測定不同缺氧/復氧時間對p53和Mettl9基因的
　　 本研究得到國家自然科學基金(編號:30770838)資助表達的影響

4、:①Mettl9基因:與正常組比較，其表達在8h處開始明顯上調(p＜0.01)，并具時間依賴性;在缺/復氧組，與缺氧組比較，H4/R8組(p＜0.01)和H8/R8組(p＜0.05) Mettl9的表達均明顯上調，具統(tǒng)計學意義。②p53基因:缺氧8h、12h和24h表達均上調(p＜0.01)，以缺氧8h表達上調最明顯;缺/復氧組，與缺氧組比較，除4h組，其余有下降趨勢。
　　 5.逆轉錄PCR測定不同缺氧/復氧時間對p53和Me