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1、第一部分超聲微泡介導(dǎo)P53質(zhì)粒對宮頸癌Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染的最優(yōu)參數(shù)選擇 目的:探討超聲微泡介導(dǎo)P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)胞的最優(yōu)轉(zhuǎn)染參數(shù)。 方法:采用形態(tài)學(xué)觀察Hela細(xì)胞生長情況;用MTT比色法檢測不同超聲條件對宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖抑制率,由此初篩出的超聲條件介導(dǎo)P53轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,最終確定超聲微泡的最優(yōu)參數(shù)。 結(jié)果: 1.超聲輻照時間30s,強(qiáng)度0.5、0.75、1W/c㎡時,細(xì)胞存活率分
2、別為(81.19±2.00)%、(77.61±1.93)%、(61.97±1.86)%;超聲輻照強(qiáng)度0.5 W/c㎡,時間10s、30s、60s時,細(xì)胞存活率分別為(84.75±0.75)%、(81.19±2.00)%、(69.56±0.32)%。其增殖抑制作用有明顯的時間效應(yīng)和劑量效應(yīng)關(guān)系。 2.將初篩出的超聲條件介導(dǎo)轉(zhuǎn)染,其中超聲輻照時間30 s,強(qiáng)度0.5 W/c㎡處理組的Hela細(xì)胞表達(dá)較多綠色熒光,轉(zhuǎn)染率7.1%,而其
3、余組的熒光表達(dá)相對較少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論:超聲微泡對宮頸癌Hela細(xì)胞有增殖抑制作用;超聲輻照時間30s,強(qiáng)度0.5 W/c㎡時,超聲微泡可最大限度促進(jìn)P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)胞。 第二部分超聲微泡介導(dǎo)P53質(zhì)粒對宮頸癌Hela細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率的研究 目的:探討優(yōu)化的超聲微泡介導(dǎo)P53轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。 方法:以第一部分的實驗結(jié)果,即超聲強(qiáng)度0.5 W/c㎡,連續(xù)輻照時間30s進(jìn)行體
4、外培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞的P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,實驗分為5組,即空白對照組、質(zhì)粒組、質(zhì)粒+微泡組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+微泡+超聲組,用RT-PCR分析各組轉(zhuǎn)染情況。 結(jié)果:RT-PCR顯示質(zhì)粒+微泡+超聲組可見較亮的電泳條帶,超聲+質(zhì)粒組有微弱的條帶可見,前者的P53/β-actin光密度比值較后者大,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,其余組未檢測到目的基因的表達(dá)。 結(jié)論:在優(yōu)化的條件下,超聲聯(lián)合微泡可促進(jìn)野生型P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)
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