Lin28與胃癌細胞化療耐藥關系的研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文Lin28與胃癌細胞化療耐藥關系的研究姓名：徐潮陽申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：王林波201104浙江大學博士學位論文中文摘要及v陀Stemblot技術檢測Lin28鼢蛆水平及蛋白水平的表達量。L越8則A水平在四株胃癌細胞中均有表達，但是在蛋白水平上沒有表達。挑選LiIl28蛋白表達陰性胃癌細胞SGC7901，穩(wěn)定轉染質(zhì)粒pcDNA31Lin28以及對照空質(zhì)粒pcDNA31，用westembon技術檢測Li

2、Il28表達水平，轉染后兩株細胞分別標記為SGC7901／Lin28和SGC7901／mock。用MTT技術比較轉染后兩株穩(wěn)定轉染細胞株生長情況，結果顯示SGC7901／Lill28和SGC7901／mock細胞生長情況未見明顯差異(P005)。用流式細胞PI單染技術比較兩株穩(wěn)定轉染細胞株細胞周期情況未見明顯差異(PO05)。我們用MTT技術，PI單染流式細胞技術以及GiemSa染色凋亡細胞計數(shù)法檢測SGC7901／Lin28和SGC7

3、90l／mock在化療藥物作用下的凋亡率的差異。M兀細胞存活率分析結果提示在化療藥物(順鉑、紫杉醇)的作用下SGC7901／LiI也8細胞的存活率高于對照組SGC7901／mock。流式細胞PI單染技術檢測顯示在化療藥物(順鉑、紫杉醇)的作用下SGC790l／L砬8細胞的凋亡率低于對照組SGC7901／mock(P005)。Giem觀染色凋亡細胞計數(shù)法檢測結果顯示在化療藥物(紫杉醇)的作用下SGC7901／Lin28細胞的凋亡率低于對照

4、組SGC7901／moCk(P005)。可見Lin28可以在胃癌細胞中誘導化療耐藥。用siRNA干擾技術，敲低SGC7901／Lin28細胞中L砬8表達量，可以逆轉Lill28誘導的耐藥情況。為初步研究Lin28誘導耐藥的機制，用qImPCR的方法檢測兩組胃癌細胞SGC790l／Lill28細胞和SGc7901／mock細胞中nliRNA(Let7a、Let一7b、Let一7c、miR107)表達情況。結果提示：SGC7901／Lin2

5、8中Let一7a、Let7b、Let一7c、nliR—107表達量比SGC7901／mock明顯下降，用siI礬A感染技術干擾SGC790l／L砬8中Lill28表達可以上調(diào)上述miI斟A的表達。上述結果提示L砬8可以抑制部分111iI斟A表達，這可能是L砬8誘導化療耐藥的機制之一。2Lin28表達與胃癌新輔助化療后病理反應的相關性分析2004年至2010年我院腫瘤外科胃癌患者接受新輔助化療患者共107例，選取其中本院完整保存有化療前胃