PDGF-A和PDGF-B與甲狀腺乳頭狀癌關(guān)系的初步研究.pdf

1、甲狀腺乳頭狀癌是最常見的甲狀腺惡性甲狀腺腫瘤，約占成人甲狀腺癌的60﹪-80﹪和兒童甲狀腺癌的70﹪左右，具有臨床生物學(xué)特性多樣、總體惡性度較低、預(yù)后良好等特點(diǎn)。甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜的過程，至今仍未明了。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)逐漸增加，近年來證實(shí)甲狀腺乳頭狀癌中存在多種癌基因和抑癌基因的異常，各種病因?qū)е碌陌┗虻募せ詈鸵职┗虻氖Щ羁墒拐＜?xì)胞轉(zhuǎn)化為生長(zhǎng)失控的惡性腫瘤細(xì)胞，而大多數(shù)癌基

2、因與調(diào)控正常細(xì)胞分裂生長(zhǎng)的各種生長(zhǎng)因子及其受體密切相關(guān)。血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的肽類生長(zhǎng)因子，是在人體各器官組織廣泛存在的一種有絲分裂原和化學(xué)趨化劑，在人體許多正常生理活動(dòng)中有著重要作用。PDGF-B鏈基因與猴肉瘤病毒的癌基因v-sis有92﹪的同源性，因此PDGF-B鏈基因又稱c-sis原癌基因。近年來隨著對(duì)PDGF研究的深入，人們逐漸發(fā)現(xiàn)PDGF參

3、與了多種人類疾病的發(fā)生和發(fā)展，并被證實(shí)與多種人類惡性腫瘤有著密切的關(guān)系。在人卵巢癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及乳腺癌等惡性腫瘤中相繼發(fā)現(xiàn)PDGF的高表達(dá)，并認(rèn)為它在某些惡性腫瘤中與腫瘤特征性的血管生成和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。 Matsuo K等發(fā)現(xiàn)在人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞系NPA培養(yǎng)過的條件培養(yǎng)基中有能強(qiáng)烈促進(jìn)NIH3T3細(xì)胞系生長(zhǎng)的物質(zhì)，其促有絲分裂的活性可被PDGF-BB抗體部分阻斷，經(jīng)鑒定為PDGF-B鏈樣的蛋白物質(zhì)，而在人甲狀腺濾泡狀癌細(xì)胞系’WRO

4、中卻沒有這種物質(zhì)，由此認(rèn)為人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞系NPA可分泌大量PDGF-B樣的蛋白物質(zhì)，此種物質(zhì)可能對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌特征性乳頭狀結(jié)構(gòu)的形成具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)的目的是通過RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌組織中PDGF-A鏈和PDGF-B鏈的mRNA及蛋白的表達(dá)，初步探討PDGF與甲狀腺乳頭狀癌的關(guān)系。 材料與方法 第一部分 取行甲狀腺乳頭狀癌根治術(shù)患者術(shù)中切除的癌組織標(biāo)本13例(病例組)．術(shù)后經(jīng)病

5、理檢驗(yàn)證實(shí)為甲狀腺乳頭狀癌。另選取結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者或甲狀腺腺瘤患者手術(shù)切除的甲狀腺組織中肉眼觀察相對(duì)正常的甲狀腺組織標(biāo)本13例作為對(duì)照組。全部標(biāo)本切除后迅速置于液氮中速凍，保存于液氮中。所有標(biāo)本熱缺血時(shí)間不超過30分鐘。用Trizol試劑提取組織總RNA，然后采用RT-PCR技術(shù)研究病例組與對(duì)照組的PDGF-A鏈和PDGF-B鏈的mRNA表達(dá)情況。將每個(gè)RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在1﹪瓊脂糖凝膠上電泳、觀察、成像。經(jīng)圖像分析獲得目的條帶的積

6、分光密度后，將各條泳道目的條帶的積分光密度值與同泳道GAPDH條帶積分光密度值相比，得到積分光密度的相對(duì)值，以此作為數(shù)據(jù)，用SAS8.1軟件包進(jìn)行隨機(jī)樣本t檢驗(yàn)對(duì)比病例組標(biāo)本與對(duì)照組標(biāo)本間PDGF-A和PDGF-B mRNA表達(dá)量差異。 第二部分 35例甲狀腺乳頭狀癌組織標(biāo)本(病例組)取自中山大學(xué)第一附屬醫(yī)院2002年-2006年行甲狀腺癌根治術(shù)患者存檔的石蠟塊，患者術(shù)前均未經(jīng)過任何抗腫瘤治療，術(shù)后經(jīng)病理檢驗(yàn)證實(shí)為甲狀腺

7、乳頭狀癌。35例正常的甲狀腺組織標(biāo)本(對(duì)照組)取自中山大學(xué)第一附屬醫(yī)院2002年-2006年甲狀腺腺瘤或節(jié)結(jié)性甲狀腺腫手術(shù)患者切除標(biāo)本的存檔石蠟塊中相對(duì)正常的甲狀腺組織。所有標(biāo)本均41μm厚連續(xù)切片，經(jīng)HE染色病理確診排除其他疾病并符合以上條件的方可入選。分別選用PDGF-A鏈和PDGF-B鏈兔抗人多克隆抗體免疫組化染色檢測(cè)PDGF-A鏈和PDGF-B鏈蛋白表達(dá)情況。免疫組化切片在顯微鏡下觀察染色情況，計(jì)算每張切片的HSCORE(his

8、tochemicalscore)得分，并以HSCORE得分代表該張切片PDGF-A鏈和PDGF-B鏈蛋白表達(dá)的水平，采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)比較病例組與對(duì)照組數(shù)據(jù)，以P<0.05作為顯著性意義的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果：第一部分： 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，病例組與對(duì)照組之間PDGF-A鏈和PDGF-B鏈mRNA的表達(dá)均存在顯著性差異(P<0.05)，病例組中PDGF-A鏈和PDGF-B鏈mRNA的表達(dá)均較對(duì)照組明顯上調(diào)。 第二部分

9、： 1．PDGF-A鏈主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞漿中，在細(xì)胞膜上也有表達(dá)，而在癌旁的間質(zhì)中僅有少量表達(dá)。甲狀腺乳頭狀癌病例組(HSCORE中位數(shù)=1.92,SEM=0.46)與對(duì)照組(HSCORE中位數(shù)0.38，SEM=0.05)：PDGF-A鏈的表達(dá)有顯著差異，P<0.05。PDGF-A鏈在甲狀腺乳頭狀癌病例組中較對(duì)照組明顯過度表達(dá)。 2．PDGF-B鏈也主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞漿中，在細(xì)胞膜上也有表達(dá)，癌旁的間質(zhì)中僅有少量

10、表達(dá)。甲狀腺乳頭狀癌病例組(HSCORE中位數(shù)=1.64，SEM=0.32)與對(duì)照組(HSCORE中位數(shù)=0.29，SEM=0.09)PDGF-B鏈的表達(dá)同樣存在顯著性差異，P<0.05。PDGF-B鏈在甲狀腺乳頭狀癌病例組中較對(duì)照組明顯過度表達(dá)。 結(jié)論 1．PDGF-A鏈和PDGF-B鏈均主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞漿中。PDGF-A鏈在甲狀腺乳頭狀癌病例組中在mRNA和蛋白兩個(gè)水平上較正常對(duì)照組均存在明顯上調(diào)。病例組PDGF