慢病毒載體介導(dǎo)Blimp1-shRNA反義基因治療調(diào)控髓源性DC前體細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的:慢病毒(lenti-virus)為載體介導(dǎo)Blimpl-shRNA轉(zhuǎn)染向樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)分化的骨髓原代細(xì)胞,觀察轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞生長及分化成熟情況。
　　方法:構(gòu)建Blimpl-shRNA,用慢病毒載體將此序列轉(zhuǎn)染于小鼠骨髓原代細(xì)胞中并誘導(dǎo)向DC分化;根據(jù)轉(zhuǎn)染條件將實(shí)驗(yàn)分為空白對照(empty-control)組、空載病毒對照(lenti-control)組和慢病毒-BlimplshRNA(

2、Ienti-Blimpl)組;于I周內(nèi)觀察熒光水平以評估轉(zhuǎn)染效率,觀察細(xì)胞的形態(tài)變化,記錄細(xì)胞的生長情況;分別于轉(zhuǎn)染后72h、96h收集細(xì)胞比較各組Blimpl mRNA、蛋白的表達(dá)情況;收集轉(zhuǎn)染后第7天細(xì)胞,檢測CDllc+、CD86+、MHCII+細(xì)胞百分比。
　　結(jié)果:病毒侵染后第3天細(xì)胞出現(xiàn)焚光,lenti-control組和Ienti-Blimpl組焚光表達(dá)率為30.8±4.4％、30.4±4.8%,而后灰光持續(xù)并穩(wěn)定;

3、生長曲線顯不,Empty-control組細(xì)胞在培養(yǎng)的前3天內(nèi)呈對數(shù)增長,第4天細(xì)胞數(shù)目達(dá)到峰值(2.45±0.26><106/孔),培養(yǎng)第6天后細(xì)胞數(shù)目略有下降(2.35±0.20xl06/孔),至第8天為2.27±0.19xl06/孔;lenti-control組和Ienti-Blimpl組細(xì)胞在病毒侵染后,細(xì)胞增殖停滯,隨后細(xì)胞數(shù)目穩(wěn)定在1.69±0.39><106/孔;Ienti-Blimpl組BlimplmRNA和蛋白的水平為

4、lenti-control組的1.3%和70.4%,為empty-control組的1.0%和74.0%;empty-control組、lenti-control組和Ienti-Blimpl組中CDllc+細(xì)胞百分比為69.24±4.98%、68.56±5.86%和72.76±5.52%,而empty-control組、lenti-control組和Ienti-Blimpl組中CD86+和MHCII+細(xì)胞百分比分別為51.08±4.93