Tremor大鼠海馬鋅水平、兩種鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)及苔蘚纖維發(fā)芽現(xiàn)象的研究.pdf

1、前言: 癲癇是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的常見(jiàn)病，許多研究表明癲癇發(fā)作與腦內(nèi)鋅穩(wěn)態(tài)的改變有關(guān)。鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體對(duì)維持細(xì)胞鋅穩(wěn)態(tài)具有重要作用。鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體1(ZnT-1)定位于胞漿膜上。體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)均證明細(xì)胞鋅水平與ZnT-1表達(dá)之間存在因果關(guān)系。腦中鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體3(ZnT-3)蛋白在海馬的苔蘚纖維中含量最高。苔蘚纖維突觸囊泡鋅水平由其膜上ZnT-3的表達(dá)量決定。本研究通過(guò)對(duì)一種遺傳性癲癇小發(fā)作動(dòng)物模型一震顫大鼠(tremor rat)海馬鋅元素水平及兩種鋅轉(zhuǎn)

2、運(yùn)體(ZnT-1和ZnT-3)的表達(dá)情況進(jìn)行分析為探討癲癇小發(fā)作與腦內(nèi)鋅穩(wěn)態(tài)改變的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。海馬內(nèi)苔蘚纖維發(fā)芽(MFS)和神經(jīng)元缺失是癲癇時(shí)普遍存在的病理現(xiàn)象，它與癲癇的反復(fù)自發(fā)性發(fā)作密切相關(guān)．海馬內(nèi)苔蘚纖維發(fā)芽是癲癇研究中重要的領(lǐng)域。本研究對(duì)于tremor大鼠海馬齒狀回和CA3區(qū)是否存在苔蘚纖維發(fā)芽現(xiàn)象進(jìn)行觀察分析。 材料與方法: 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：tremor大鼠、野生型大鼠(WTC rat)、正常Wistar大

3、鼠各24只，均為10周齡。 2、提取大鼠DNA,以突變tm基因特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定tremor大鼠和WTC大鼠。 3、應(yīng)用原子吸收光譜法檢測(cè)tremor大鼠、WTC大鼠及正常Wistar大鼠海馬鋅元素水平。 4、提取大鼠海馬組織膜蛋白，用半定量Western blotting的方法研究tremor大鼠、WTC大鼠及正常Wistar大鼠海馬鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體1和3蛋白的相對(duì)表達(dá)情況。 5、提取大鼠海馬組織RN

4、A，用半定量RT-PCR的方法研究tremor大鼠、WTC大鼠及正常Wistar大鼠海馬鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體1mRNA相對(duì)表達(dá)情況。 6、應(yīng)用鋅金屬自顯影(ZnSeAMG)技術(shù)觀察tremor大鼠、WTC大鼠及正常Wistar大鼠海馬苔蘚纖維發(fā)芽現(xiàn)象。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1、基因鑒定結(jié)果:有陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物(片段長(zhǎng)度為197bp)的大鼠為tremor大鼠。 2、反復(fù)癲癇小發(fā)作的tremor大鼠海馬鋅元素水平明顯高于WTC大鼠及

5、正常Wistar大鼠；WTC大鼠與正常Wistar大鼠海馬鋅元素水平無(wú)明顯差異。 3、反復(fù)癲癇小發(fā)作的tremor大鼠海馬鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體1蛋白表達(dá)明顯高于WTC大鼠及正常Wistar大鼠；WTC大鼠與正常Wistar大鼠海馬鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體1蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異。三組大鼠海馬鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體3蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異。 4、反復(fù)癲癇小發(fā)作的tremor大鼠海馬鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體1 mRNA表達(dá)明顯高于WTC大鼠及正常Wistar大鼠；WTC大鼠與正常Wista

6、r大海馬鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體1 mRNA表達(dá)無(wú)明顯差異。 5、反復(fù)癲癇小發(fā)作的tremor大鼠海馬的齒狀回和CA3區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽評(píng)分明顯高于WTC大鼠組及正常Wistar大鼠；WTC大鼠與正常Wistar大鼠海馬的齒狀回和CA3區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽評(píng)分無(wú)明顯差異。 結(jié)論: 1、反復(fù)癲癇小發(fā)作的tremor大鼠海馬鋅元素水平增高。 2、反復(fù)癲癇小發(fā)作的tremor大鼠海馬鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體1蛋白及mRNA表達(dá)增多，而鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體3表達(dá)沒(méi)有