鋅轉(zhuǎn)運體ZnT8在小鼠睪丸和卵巢中表達(dá)和分布的研究.pdf

1、鋅是機(jī)體必需的微量元素之一，是體內(nèi)許多金屬結(jié)合蛋白和細(xì)胞發(fā)揮正常功能的必要成分。鋅離子不能自由穿越細(xì)胞膜，其跨膜轉(zhuǎn)運需要特定的鋅離子轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)，以維持細(xì)胞內(nèi)鋅離子的穩(wěn)態(tài)。鋅轉(zhuǎn)運體ZnT8屬于SLC30家族，克隆自SLC30A8基因（染色體8q24.11），是一段含有369個氨基酸片段的蛋白。在胰島素合成過程中，存在于胰島素分泌小泡上的ZnT8使鋅離子進(jìn)入小泡參與鋅胰島素六聚體的形成，進(jìn)而參與細(xì)胞完成胰島素形成和儲存的過程。因為ZnT8

2、在胰島alpha細(xì)胞、甲狀腺腺泡上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞等內(nèi)分泌細(xì)胞也有表達(dá)，所以ZnT8被認(rèn)為是一種與內(nèi)分泌細(xì)胞有緊密聯(lián)系的鋅轉(zhuǎn)運體。本研究中，我們探討了ZnT8在生殖系統(tǒng)的內(nèi)分泌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，進(jìn)一步驗證ZnT8與內(nèi)分泌細(xì)胞的關(guān)系。
　　 材料與方法：
　　 選取健康CD-1成年小鼠30只（雄性和雌性各半，體重20-25克，購自中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物部），給予充足的食物和自來水。
　　 使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（R

3、T-PCR）在mRNA水平檢測ZnT8在睪丸和卵巢的表達(dá)，用1％瓊脂糖凝膠電泳分離PCR的產(chǎn)物。運用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測ZnT8在睪丸的表達(dá)。應(yīng)用金屬自顯影（AMG）組織化學(xué)染色技術(shù)顯示游離鋅離子在睪丸和卵巢兩種組織中的分布。應(yīng)用免疫熒光染色技術(shù)驗證ZnT8和StAR蛋白在睪丸Leydig細(xì)胞和次級卵泡顆粒細(xì)胞的共存。
　　 實驗結(jié)果：
　　 1、ZnT8 mRNA在睪丸和卵巢表達(dá)的RF-PCR結(jié)果
　　 R

4、T-PCR結(jié)果顯示在250bp和500bp之間（ZnT8引物的大小為323bp）的位置上出現(xiàn)了清楚的條帶，表明ZnT8 mRNA在睪丸和卵巢的表達(dá)。
　　 2、ZnT8蛋白在睪丸分布與表達(dá)的免疫組化結(jié)果
　　 與陰性對照組比較，ZnT8蛋白主要分布于睪丸曲精小管之間的Leydig細(xì)胞，同時，在曲精小管的基底部的精原細(xì)胞也有ZnT8蛋白分布。
　　 3、鋅離子在睪丸分布的AMG結(jié)果
　　 睪丸的鋅離子分布有

5、向曲精小管中心集中的趨勢。在曲精小管基底部和曲精小管之間Leydig細(xì)胞中，也可以觀察到游離鋅離子的分布。
　　 4、鋅離子在卵巢分布的AMG結(jié)果
　　 卵巢的游離鋅離子廣泛分布于卵巢黃體、初級卵泡和次級卵泡。在次級卵泡，卵母細(xì)胞和卵泡膜內(nèi)側(cè)的顆粒細(xì)胞內(nèi)有大量鋅離子分布。
　　 5、睪丸Leydig細(xì)胞和卵巢次級卵泡的ZnT8免疫熒光結(jié)果
　　 在睪丸的Leydig細(xì)胞和卵巢次級卵泡的顆粒細(xì)胞層上進(jìn)行Zn