蛇毒與蜜蜂毒外周誘致痛敏神經(jīng)機制的研究.pdf

1、疼痛是一種復雜的生理心理活動，是臨床上最常見的癥狀之一。它包括傷害性刺激作用于機體所引起的痛感覺，以及機體對傷害性刺激的痛反應。臨床病理性痛可表現(xiàn)為持續(xù)性的自發(fā)痛及伴有長時程持續(xù)性痛敏和觸誘發(fā)痛現(xiàn)象。闡明病理性痛的發(fā)生和慢性化機制在很大程度上依賴于能夠模擬臨床病理性痛特征的動物模型的深入研究。目前常用的病理性痛機制研究的模型有福爾馬林試驗模型、完全弗氏佐劑模型、坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎模型和坐骨神經(jīng)慢性壓迫模型等。至今，新的病理性痛的模型還在不

2、斷的開發(fā)和探索中，原因即在于上述動物疼痛模型雖然各有特點，但亦有其局限性，不能完全模擬病理痛的特征。 近些年來，利用動物毒素致痛模擬病理性痛癥狀來探索痛信息傳遞與調(diào)控的機制的研究逐漸增多。本研究中利用外周給與動物毒素致痛的模型來探討動物毒素誘致痛敏發(fā)生的神經(jīng)機制。本研究包含以下兩部分內(nèi)容： 1、本課題聯(lián)合應用形態(tài)學和行為藥理學方法觀察了坐骨神經(jīng)內(nèi)注射蛇毒(SV)誘致痛敏的神經(jīng)機制。結(jié)果如下： ①坐骨神經(jīng)內(nèi)注射SV

3、導致坐骨神經(jīng)發(fā)生脫髓鞘(demyelination)現(xiàn)象。注射后2周坐骨神經(jīng)髓鞘的改變最為明顯，接受NS注射的對照組坐骨神經(jīng)未見明顯改變。 ②坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎組手術側(cè)脊髓內(nèi)P物質(zhì)(SP)、降鈣素基因相關肽(CGRP)、甘丙肽(GAL)和Ⅰ型囊泡膜谷氨酸轉(zhuǎn)運體(VGluT1)的表達均明顯低于對照側(cè)。SV致痛后注射側(cè)脊髓內(nèi)SP、CGRP、GAL和無髓纖維標志物IB4的免疫標記結(jié)果與對照側(cè)相比較未見明顯改變；但注射側(cè)脊髓深層VGluT

4、1的表達明顯較對側(cè)為高。SV組注射側(cè)脊髓背角內(nèi)一氧化氮合成酶(NOS)的表達明顯增高，而坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎組手術側(cè)脊髓背角內(nèi)NOS的表達無改變。 SV致痛后星形膠質(zhì)細胞標志物膠質(zhì)源性纖維酸性蛋白(GFAP)和小膠質(zhì)細胞標志物OX42的表達持續(xù)增高，鏡下觀察到星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞呈活化狀態(tài)。 ③SV注射后6h動物注射側(cè)后肢出現(xiàn)了熱痛敏和機械性痛敏。2w左右熱痛敏和機械性痛敏達到高峰，4w后動物后肢熱痛敏恢復正常，5w后動

5、物后肢的機械性痛敏恢復正常。動物對側(cè)后肢未出現(xiàn)熱痛敏和機械性痛敏。 ④NMDA受體的非競爭性拮抗劑MK801、非NMDA受體拮抗劑CNQX和膠質(zhì)細胞代謝抑制劑氟代檸檬酸均可抑制坐骨神經(jīng)內(nèi)注射SV誘致的熱痛敏和機械性痛敏。 上述結(jié)果提示坐骨神經(jīng)內(nèi)注射SV引起外周神經(jīng)脫髓鞘可導致動物出現(xiàn)痛敏的病理痛現(xiàn)象。SV致痛引起脊髓內(nèi)神經(jīng)化學物質(zhì)的改變與坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎模型不同。脊髓內(nèi)NMDA受體和非NMDA受體以及膠質(zhì)細胞均參與了SV

6、所致痛敏的發(fā)生和持續(xù)化過程。 2、5-HT受體不同亞型參與介導了足底皮下注射蜜蜂毒誘致痛敏的過程 本課題應用半定量RT-PCR方法觀察了5-HT受體不同亞型參與皮下注射蜜蜂毒誘發(fā)炎性痛過程中的表達變化，結(jié)果如下： BV致痛后1h和4h，BV注射側(cè)大鼠腰段(L3～L6)背根節(jié)(DRG)內(nèi)5-HT1A、5-HT1B、5-HT2A和5-HT3受體亞型mRNA的表達水平均明顯升高，而注射側(cè)對側(cè)5-HT1A、5-HT1B和

7、5-HT2A受體亞型mRNA的表達水平僅在4h升高。5-HT2C、5-HT4、5-HT6和5-HT7僅在4h升高5-HT1D、5-HT1F和5-HT5A受體亞型mRNA的表達水平在1h和4h均無明顯變化。BV刺激后，在大鼠DRG內(nèi)仍未檢測到5-HT1E、5-HT2B和5-HT5B受體亞型。 足底皮下注射BV后注射側(cè)大鼠腰段(L3～L6)脊髓內(nèi)5-HT1A、5-HT1B、5-HT2A和5-HT3受體亞型mRNA的表達水平在1h和4

8、h均明顯升高。5-HT2C，5-HT4，5-HT5A和5-HT7受體亞型mRNA的表達水平在4h均明顯升高。未發(fā)現(xiàn)雙側(cè)5-HT1D、5-HT1F和5-HT6受體亞型mRNA的表達水平發(fā)生變化。在正常及BV致痛大鼠，脊髓內(nèi)仍未檢測到5-HT1E，5-HT2B和5-HT5B受體亞型。 蜜蜂毒致痛后大鼠腰段脊髓和DRG內(nèi)5-HT受體亞型mRNA的表達發(fā)生不同程度的變化，提示這些受體亞型可能通過不同機制參與中樞和外周傷害性信息的傳遞和調(diào)