慢性胰腺炎疼痛的外周神經(jīng)機(jī)制研究.pdf

1、目的:慢性胰腺炎(chronic pancreatitis，CP)是常見的胰腺疾病之一，發(fā)病率呈上升趨勢。疼痛是CP治療最棘手的難題，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。長期以來，由于對其發(fā)病機(jī)制缺乏深入認(rèn)識，目前尚無滿意的治療手段，臨床治療僅限于對癥，療效欠佳。近年來研究認(rèn)為神經(jīng)源性炎癥是CP持續(xù)性疼痛的重要發(fā)病機(jī)制。CP時神經(jīng)及神經(jīng)束膜受損，炎細(xì)胞、免疫細(xì)胞浸潤，多種炎性介質(zhì)、神經(jīng)肽、神經(jīng)營養(yǎng)及神經(jīng)因子的釋放，可致敏損傷的感覺神經(jīng)，參與胰腺痛覺

2、高敏的形成。
　　 蛋白酶激活受體2(proteinase-activated receptor2，PAR2)屬于蛋白酶激活受體超家族的一員，是慢性疼痛和神經(jīng)源性炎癥研究領(lǐng)域的關(guān)注新熱點。PAR2功能性表達(dá)予初級傳入神經(jīng)元，可直接促進(jìn)傷害性信息上傳或通過致敏辣椒素(transient receptorpotential vanilloid1，TRPV1)受體，介導(dǎo)痛覺高敏和神經(jīng)源性炎癥的發(fā)生發(fā)展。PAR2在胰腺局部及支配胰腺的背

3、根神經(jīng)節(jié)中均有表達(dá)，與胰腺炎癥、外分泌等功能息息相關(guān)。但PAR2在CP時的表達(dá)變化以及其在CP疼痛中所發(fā)揮的作用尚未見報道。為此，我們采用三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS)逆行胰膽管注射的方法建立CP大鼠模型，觀察PAR2及TRPV1受體在背根神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)變化并明確PAR2在CP熱痛覺高敏感形成中的作用。
　　 非甾體類抗炎藥(nonsteroidal anti-inflamm

4、atory durgs，NSAIDs)是臨床常用的治療CP疼痛的藥物。但長期口服該藥對CP疼痛及纖維化的影響不詳。口服選擇性COX-2抑制劑羅非考昔可通過抑制巨噬細(xì)胞遷移及星形細(xì)胞的激活減輕CP的炎癥進(jìn)展，抑制胰腺纖維化，發(fā)揮保護(hù)性作用。而NSAIDs的突出副作用為胃腸道黏膜損傷，可致菌群移位，內(nèi)毒素血癥的發(fā)生。且NSAIDs類藥物能誘發(fā)組織氧化應(yīng)激的形成。內(nèi)毒素及氧化應(yīng)激正是加重胰腺纖維化的關(guān)鍵因素。因此，為明確長期口服NSAIDs類

5、藥物在CP疼痛及纖維化進(jìn)程中是發(fā)揮保護(hù)性還是傷害性作用，我們采用CP大鼠模型，觀察了長期應(yīng)用萘普生對模型大鼠熱痛覺閾值和纖維化的影響。
　　 方法:
　　 健康雄性SD大鼠，體重250-300g。采用胰膽管內(nèi)逆行注射TNBS的方法建立CP大鼠模型。假手術(shù)組大鼠開腹翻動胰腺后即關(guān)腹。利用腹部熱痛閾值觀察CP大鼠的熱痛覺高敏現(xiàn)象。取材T8-T10節(jié)段背根神經(jīng)節(jié)，采用免疫熒光及Western blot方法觀察背根神經(jīng)節(jié)(dor

6、sal root ganglia，DRG)中PAR2及TRPV1受體的表達(dá)變化。并將PAR2的Western blot結(jié)果與相應(yīng)的腹部熱痛閾值行相關(guān)分析。采用高劑量(50000u/Kg)及低劑量(25000u/Kg)腆蛋白酶抑制劑烏司他丁抑制PAR2的活性，觀察急性及慢性(連續(xù)給藥5天)腹腔給藥后對CP大鼠腹部熱痛閾的影響。
　　 萘普生的給藥方法選擇灌胃及腹腔注射，劑量選擇為20mg/Kg及40mg/Kg。TNBS胰管內(nèi)注射2

7、周后開始給予萘普生治療，共給藥3周。取材胰腺組織，行蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin，HE)染色及病理評分來判斷胰腺損傷；以Van-Gieson(VG)或Sirus-red染色后的膠原表達(dá)陽性面積和胰腺組織的羥脯氨酸含量評價胰腺的纖維化程度。ELESIA法檢測血清中腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor，TNF-α)表達(dá)以明確萘普生的全身效應(yīng)。通過血漿二胺氧化酶(diamine oxidase

8、，DAO)及內(nèi)毒素檢測評價腸黏膜屏障的功能。
　　 選擇SPSS13.0軟件行統(tǒng)計學(xué)分析，P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 1、TNBS逆行胰膽管注射可成功建立CP熱痛覺高敏感大鼠模型。
　　 2、PAR2及TRPV1在CP大鼠的背根神經(jīng)節(jié)中表達(dá)明顯上調(diào)；PAR2與大鼠腹部熱痛閾值呈顯著負(fù)相關(guān)；急性給予胰蛋白酶抑制劑烏司他丁能以劑量依賴的方式抑制CP大鼠的腹部熱痛覺高敏；PAR2可能通