肥大細(xì)胞參與慢性胰腺炎痛發(fā)生的機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：
　　慢性胰腺炎(Chronic pancreatitis)的發(fā)病率逐年增加，其特點(diǎn)是炎癥，萎縮，纖維化伴隨進(jìn)行性的導(dǎo)管病變和包括多種多樣的內(nèi)分泌和外分泌的機(jī)能不足的功能變化和多種疼痛模式。在慢性胰腺炎的臨床研究報(bào)道中，最普遍的常見的病因?qū)W是酒精(45.8％)和特發(fā)性因素(24.3％)。最常見的個(gè)體疼痛模式是45％的病人表現(xiàn)出持續(xù)的嚴(yán)重的疼痛。其腹部痛特點(diǎn)是高度變異的，多數(shù)病人伴發(fā)嚴(yán)重的疼痛。目前，腹部痛仍然是慢性胰腺炎

2、最嚴(yán)重的癥狀。疼痛作為慢性胰腺炎最常見，最難控制的癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活。在最新的研究報(bào)道和傳統(tǒng)的治療策略中，治療慢性胰腺炎都以疼痛為首要治療目標(biāo)。但是，目前的研究對慢性胰腺炎疼痛的機(jī)制知之甚少。
　　胰腺的神經(jīng)炎性是胰腺神經(jīng)病變的組織化學(xué)的特點(diǎn)，并且與慢性胰腺炎的腹部神經(jīng)病理性痛感覺相關(guān)。然而，造成胰腺神經(jīng)炎性的炎癥細(xì)胞與神經(jīng)病理性痛的關(guān)系還不清楚。文獻(xiàn)報(bào)道有很多的內(nèi)臟痛疾病發(fā)現(xiàn)肥大細(xì)胞富集在器官內(nèi)的神經(jīng)纖維周圍，并且與痛感覺

3、相關(guān)。慢性胰腺炎誘發(fā)的神經(jīng)病理性痛時(shí)胰腺神經(jīng)內(nèi)的神經(jīng)周圍肥大細(xì)胞的富集提示胰腺組織中肥大細(xì)胞的存在誘導(dǎo)了內(nèi)臟痛覺過敏的發(fā)生。肥大細(xì)胞是消化道系統(tǒng)，皮膚，肺，腦和其他組織中的免疫細(xì)胞，通過釋放肥大細(xì)胞來源的脫顆粒產(chǎn)物如組胺，血清素，細(xì)胞因子，前列腺素等，經(jīng)典性地通過Ⅰ型超敏反應(yīng)應(yīng)答過敏源和一些導(dǎo)致過敏的因素。肥大細(xì)胞脫顆粒代表激活，然后釋放激活的神經(jīng)元的分子如組胺，血清素，NGF以及分泌的類胰蛋白酶，這些分子通過相應(yīng)的受體來激活和敏化外周

4、神經(jīng)元，引起疼痛和神經(jīng)元功能的調(diào)節(jié)障礙。因此，本實(shí)驗(yàn)擬探討肥大細(xì)胞在慢性胰腺炎痛發(fā)生的機(jī)制研究。
　　研究方法：
　　1.采用正常胰腺組織和慢性胰腺炎組織進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色，比較兩組胰腺組織中肥大細(xì)胞的表達(dá)差異;建立慢性胰腺炎大鼠模型，采用vonFrey進(jìn)行機(jī)械性測痛和面部疼痛表情量表測量疼痛。通過在慢性胰腺炎動(dòng)物整體模型給予肥大細(xì)胞的穩(wěn)定劑酮替芬，觀察給予肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑對實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠的疼痛影響。
　　2.采用免疫

5、熒光的方法觀察PAR2受體在正常胰腺和慢性胰腺炎胰腺組織中的表達(dá)。采用免疫熒光和蛋白免疫印跡的方法，觀察對照組和慢性胰腺炎模型組大鼠的DRG神經(jīng)元中PAR-2受體，TRPV1受體和NGF及其高親和力受體TrkA的表達(dá)差異。
　　3.采用免疫熒光雙標(biāo)法觀察大鼠DRG神經(jīng)元上PAR-2受體和TrkA受體的共表達(dá)情況。急性分離DRG神經(jīng)元細(xì)胞，通過電生理實(shí)驗(yàn)觀察TRPV1通道上，對照組，PAR-2激動(dòng)劑組，NGF組以及NGF+PAR-2

6、激動(dòng)劑組，比較四組數(shù)據(jù)的給藥前后電流增漲變化情況。
　　研究結(jié)果：
　　1.慢性胰腺炎病人胰腺組織肥大細(xì)胞表達(dá)明顯增加。慢性胰腺炎模型大鼠較對照組大鼠的胰腺組織的肥大細(xì)胞數(shù)目也明顯增加。在慢性胰腺炎模型大鼠給予肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑，腹部機(jī)械痛減輕。
　　2.在胰腺組織中，高倍鏡觀察發(fā)現(xiàn)PAR-2受體蛋白分布圍繞在核周圍的胞漿中，并且PAR-2受體在慢性胰腺炎組織中表達(dá)較正常胰腺組織增加。相較對照組大鼠，慢性胰腺炎模型大鼠的D

7、RG神經(jīng)元中PAR-2受體，TRPV1受體和NGF及其高親和力受體TrkA受體的表達(dá)都明顯增加。
　　3.在正常大鼠DRG神經(jīng)元，PAR-2受體與TrkA受體存在共表達(dá)，并且共標(biāo)的大多是小直徑的神經(jīng)元細(xì)胞。急性分離的DRG神經(jīng)元進(jìn)行電生理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PAR-2激動(dòng)劑組和NGF組分別相較對照組電流增漲百分比明顯增加，PAR-2激動(dòng)劑+NGF組相比PAR-2激動(dòng)劑組和NGF組電流增漲百分比也明顯增加。
　　研究結(jié)論：
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