Kindlin-2與Prdx4之間的相互作用研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)碩士學(xué)位論文Kindlin2與Prdx4之間的相互作用研究StudiesontheinteractionbetweenKindlin2andPrdx4課題來源：國家自然科學(xué)基金(No81171958、)學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院駱婷婷姜勇教授龔小衛(wèi)副教授病理學(xué)與病理生理學(xué)學(xué)術(shù)型碩士基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2013年5月20日廣州中文摘要Kindlin2對(duì)整合素的激活起著至關(guān)重要的作用。Kindlin2的信

2、號(hào)傳導(dǎo)分為兩部分，即信號(hào)由內(nèi)到外傳導(dǎo)和由外到內(nèi)的傳導(dǎo)過程。盡管多種蛋白質(zhì)都能與B整合素胞內(nèi)段相互作用，但在Kindlin的功能得到闡明之前，只有踝蛋白被確切證實(shí)能夠觸發(fā)整合素活化。然而事實(shí)上，在小鼠基因敲除的研究中，證實(shí)了Kindlin才是整合素活化所必需的。Kindlin2有可能在癌癥的發(fā)生和進(jìn)展中也扮演著重要角色。許多研究都表明，Kindlin2的表達(dá)水平改變與某些腫瘤密切相關(guān)。我們的前期研究也證實(shí)，Kindlin2的表達(dá)水平不但與

3、前列腺癌的惡性程度密切相關(guān)，而且調(diào)控著前列腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。另外，Kindlin2在不同肺癌細(xì)胞系中表達(dá)不同，且其過表達(dá)可顯著促進(jìn)U1752細(xì)胞的遷移。Kindlin家族成員可能通過與整合素的作用來參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程的調(diào)節(jié)，但其機(jī)制還遠(yuǎn)未闡明。鑒于Kindlin2在整合素活化中的關(guān)鍵性作用以及與某些腫瘤的發(fā)生發(fā)展的密切相關(guān)性，我們開展了尋找新的Kindlin2相互作用蛋白的工作。在前期研究中，我們利用特異性抗Kindlin一2

4、抗體對(duì)前列腺癌細(xì)胞系PC3細(xì)胞裂解物進(jìn)行pulldown，樣品利用2D熒光差異蛋白表達(dá)分析系統(tǒng)(2DDIGE)進(jìn)行分析。2DDIGE系統(tǒng)是在傳統(tǒng)雙向電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合了多重?zé)晒夥治龅姆椒?，在同一塊膠上共同分離多個(gè)分別由不同熒光標(biāo)記的樣品，獲得差異點(diǎn)后，我們利用全自動(dòng)凝膠取點(diǎn)、酶解、點(diǎn)樣工作站對(duì)差異點(diǎn)進(jìn)行處理，隨后用4800型MALDITOF／TOF分析儀對(duì)差異點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。在得出的差異點(diǎn)中，其中一個(gè)令人感興趣的蛋白是過氧化物酶蛋白

5、(peroxiredoxin，Prdx)家族的一個(gè)成員Prdx4。過氧化物酶蛋白是一個(gè)多功能蛋白家族，它有清除生物體內(nèi)氧自由基的作用，研究表明長期的體能鍛煉能上調(diào)過氧化物酶蛋白的表達(dá)，以及結(jié)合許多慢性疾病過程中所產(chǎn)生的氧自由基，同樣在免疫應(yīng)激條件下，過氧化物酶蛋白呈過氧化狀態(tài)以此保護(hù)機(jī)體免受損傷。過氧化物酶蛋白家族成員分子量大小在20～30kDa范圍內(nèi)，且廣泛分布在生物體內(nèi)。在大多數(shù)人類細(xì)胞中，它占到可溶性蛋白的01～1％，并且是紅細(xì)胞