BRSK2與Mnk1a的相互作用研究.pdf

1、BRSK2(Brain Selective Kinase2)是我們實(shí)驗(yàn)室克隆的一個(gè)在胰腺和腦組織特異高表達(dá)的基因。根據(jù)BRSK2激酶結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列將其歸類(lèi)于CAMK激酶家族的AMPK亞家族。LKB1(又名STK11,即絲氨酸-蘇氨酸激酶11)能夠磷酸化激活包括BRSK2在內(nèi)的AMPK激酶亞家族的13個(gè)成員。組織表達(dá)譜分析表明BRSK2在腦和胰腺組織中呈現(xiàn)特異性的高表達(dá),并且胰腺組織中的表達(dá)豐度比腦組織中的表達(dá)豐度高。以往的研究表明,

2、BRSK2在神經(jīng)元細(xì)胞極化、神經(jīng)遞質(zhì)釋放的突觸前調(diào)節(jié)等過(guò)程中發(fā)揮重要功能。我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)BRSK2也在參與腫瘤細(xì)胞能量壓力調(diào)節(jié),增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞抵抗能量饑餓等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　 Mnkla(MAPK-interacting kinase la)是受絲裂原活化蛋白激酶MAPK激活的蘇氨酸/絲氨酸激酶,它既可被生長(zhǎng)因子激活的ERK磷酸化激活,又可被應(yīng)急激活的p38磷酸化激活,具有整合不同MAPK信號(hào)的作用。大量的研究已

3、經(jīng)證實(shí)Mnkla能夠磷酸化下游的真核翻譯起始因子elF4E209位絲氨酸,從而調(diào)控mRNA5'甲基鳥(niǎo)苷帽子結(jié)構(gòu)依賴(lài)的蛋白翻譯過(guò)程。近年來(lái)的細(xì)胞腫瘤學(xué)研究表明,Mnkla在許多腫瘤細(xì)胞中上調(diào),并通過(guò)磷酸化下游的原癌基因elF4E,上調(diào)若干原癌基因,例如CyclinD和VEGF的轉(zhuǎn)錄,增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞抗凋亡能力,促進(jìn)癌細(xì)胞惡性增殖。
　　 本研究在實(shí)驗(yàn)室前期酵母雙雜交篩選工作取得互作結(jié)果的基礎(chǔ)上,繼續(xù)深入研究BRSK2與Mnkla的相互

4、作用及其功能意義。我們首先用近年來(lái)廣泛報(bào)道的能夠激活ERK激酶,促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞浸潤(rùn)、抗凋亡、存活的神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF來(lái)刺激PANC-1細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)NGF能夠上調(diào)PANC-1細(xì)胞內(nèi)的BRSK2 mRNA和蛋白水平,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在能量饑餓壓力下的存活,其次我們利用GSTpull-down蛋白相互作用的方法,證實(shí)BRSK2能夠在體外與Mnkla實(shí)現(xiàn)互作,并體外磷酸化Mnkla,免疫熒光共定位證明BRSK2與Mnkla在細(xì)胞核周富集,存在顯著的共