基于DNA條形碼的長江上游江津段魚類早期資源種類鑒定.pdf

1、準(zhǔn)確鑒定魚卵的種類是開展魚類早期資源研究和評估魚類資源年際補充量重要的前提。本研究采用DNA條形碼技術(shù)，選擇Cyt b基因作為標(biāo)記基因，使用合適的通用引物對其PCR擴增，經(jīng)過測序和序列分析，對長江上游江津江段所采集到的漂流性卵和人工魚巢上的粘性卵進(jìn)行種類鑒定，以期為魚類早期資源種類鑒定建立一種快速、準(zhǔn)確的分子鑒定方法。其主要研究結(jié)果如下：
　　1.基于DNA條形碼魚類早期資源種類鑒定技術(shù)的建立
　　DNA條形碼技術(shù)鑒定魚卵種

2、類的關(guān)鍵在于魚卵 DNA的提取、通用引物的篩選以及PCR擴增。本研究比較了3種單枚魚卵DNA提取方式，3對通用引物的擴增效果和測序結(jié)果的準(zhǔn)確度。最后選擇快速提取魚卵DNA法作為單枚魚卵DNA的提取方法，通用引物對1 H15149/L14735作為擴增魚類Cyt b基因上長度為464bp的DNA片段。再將未經(jīng)純化的PCR產(chǎn)物送至測序，將測序所得的序列處理后在NCBI數(shù)據(jù)庫中利用自帶的blast軟件進(jìn)行序列比對和物種鑒定。堿基相似度在98％

3、之上的即可認(rèn)為是同一種魚。
　　2.2014年長江上游江津段人工魚巢上的粘性卵種類鑒定
　　2014年4月29日、5月11日選取了長江上游江津段順江、朱楊和龍華3個樣品采集點的人工魚巢進(jìn)行粘性卵的采集，兩次共隨機采集到147個樣本，采用上述建立的分子鑒定技術(shù)對全部樣本進(jìn)行種類鑒定。結(jié)果顯示在三個采樣點所采魚卵的種類有鯽(Carassius auratus)和鯉(Cyprinuscarpio)2種，順江的20個樣本中，鯽16個

4、，占80.00%；鯉4個，占20.00%。在朱楊采集到86個樣本中，鯽有20個，占23.26%；鯉有66個，占76.74%。龍華的42個樣本中，鯽有31個，占73.81%；鯉有11個，占26.19%。
　　3.2015年長江上游江津段人工魚巢上的粘性卵種類鑒定
　　2015年3月26日、4月15日和5月13日選取了長江上游江津段順江、朱楊、二郎石和石蟆4個樣品采集點的人工魚巢進(jìn)行粘性卵的采集，共隨機采集到1989個樣本，采用

5、上述建立的分子鑒定技術(shù)對其中的468個樣本進(jìn)行種類鑒定，包括400枚魚卵和68尾幼魚。結(jié)果表明魚卵種類有2種，分別是鯉和鯽，幼魚種類共有11種，分別為鯉、鯽、李氏吻鰕虎魚（Rhinogobius leavelli），短須頜須鮈（Gnathopogon imberbis），高體鳑鲏（Rhodeus ocellatus），華鳈（Sarcocheilichthys sinensis），大鰭鱊（Acheilognathus macropteru

6、s），太湖新銀魚（Neosalanx taihuensis），麥穗魚（Pseudorasbora parva），食蚊魚（Gambusia affinis），嘉陵頜須鮈（Gnathopogon herzensteini）。
　　4.2015年長江上游江津段漂流性卵種類鑒定
　　2015年5月20日至6月9日在長江江津油溪段使用圓錐網(wǎng)共隨機采集107個漂流性魚卵，采用上述建立的分子鑒定技術(shù)對其進(jìn)行種類鑒定，鑒定結(jié)果表明樣本中共有

7、14種，其中鰱（Hypophthalmichthys molitrix）2個，占1.85%；中華金沙鰍（Jinshaia sinensis）2個，占1.85%；吻鮈（Rhinogobio typus）19個，占17.59%；子陵吻鰕虎魚（Rhinogobius giurinus）1個，占0.93%；宜昌鰍鮀（Gobiobotia filifer）36個，占33.33%；銅魚（Coreius heterokon）5個，占4.63%；寡鱗飄

8、魚（Pseudolaubuca engraulis）22個，占20.37%；光唇蛇鮈（Saurogobio gymnocheilus）7個，占6.48%；草魚（Ctenopharyngodon idellus）4個，占3.70%；銀鮈（Squalidus argentatus）5個，占4.63%；中華沙鰍（Botia superciliaris）1個，占0.93%；銀飄魚（Pseudolaubuca sinensis）1個，占0.93%

9、；異鰾鰍鮀（Xenophysogobio boulengeri）1個，占0.93%；犁頭鰍（Lepturichthys fimbriata）1個，占0.93%。
　　5.長江上游江津段粘性卵產(chǎn)卵場水生生物和水質(zhì)環(huán)境調(diào)查
　　為了解粘性卵產(chǎn)卵場的生態(tài)環(huán)境，本研究調(diào)查了2015年3月至5月人工魚巢附近的水生生物和水質(zhì)環(huán)境。順江采樣點共鑒定出浮游藻類6門147種，浮游動物3門19種，朱楊采樣點共鑒定出浮游藻類6門160種，浮游動物

10、3門19種，二郎石采樣點共鑒定出浮游藻類6門116種，浮游動物3門52種，石蟆采樣點共鑒定出浮游藻類6門96種，浮游動物3門32種。根據(jù)浮游藻類的種類及數(shù)量，利用藻類多樣性指數(shù)法對水質(zhì)進(jìn)行評價，Shannon-Wiener生物多樣性指數(shù)、Margalef豐富度指數(shù)和Pielou均勻度指數(shù)的變化范圍分別是1.663~3.342，5.438~10.135和0.470~0.826，水質(zhì)評價結(jié)果為除了二郎石的水樣在5月時受到了中度污染外，其余時