桂枝茯苓膠囊治療原發(fā)性痛經(jīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機理研究.pdf

1、桂枝茯苓膠囊由桂枝、茯苓、桃仁、白芍、牡丹皮組成，處方源于張仲景《金匱要略》桂枝茯苓丸，為治療婦科血瘀證的經(jīng)典名方。具有活血化瘀、緩消癥塊、去瘀生新、理氣止痛之功效，臨床用于治療子宮肌瘤、慢性盆腔炎、痛經(jīng)、卵巢囊腫等婦科疾病，療效確切，但其物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制研究相對較少。
　　 本研究試圖通過化學(xué)分離結(jié)合效應(yīng)評價的方式，采用從整體動物到細胞及分子的多種模型，從不同角度闡釋桂枝茯苓膠囊治療原發(fā)性痛經(jīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制。
　

2、　 一、桂枝茯苓膠囊治療原發(fā)性痛經(jīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)研究
　　 1.桂枝茯苓膠囊提取與各部位的分離
　　 本研究對膠囊內(nèi)容物進行提取，不同極性溶劑萃取分離及大孔樹脂吸附梯度洗脫兩種分離方案，將全方分為揮發(fā)油部位、石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位、水提部位；大孔樹脂水洗脫部位、20％乙醇洗脫部位、40％乙醇洗脫部位、60％乙醇洗脫部位、95％乙醇洗脫部位，并針對各部位成分的特點建立了相應(yīng)的指紋圖譜。
　　

3、 2.桂枝茯苓膠囊不同分離部位活性評價
　　 本研究通過小鼠離體子宮收縮模型，對桂枝茯苓膠囊各部位樣品進行了活性評價。結(jié)果顯示：揮發(fā)油部位，乙酸乙酯萃取部位，大孔樹脂40％乙醇洗脫部位，60％乙醇洗脫部位均表現(xiàn)出抑制活性。
　　 卵巢顆粒細胞增殖模型結(jié)果顯示：正丁醇部位及大孔樹脂60％乙醇洗脫部位均具有顯著的促進大鼠卵巢顆粒細胞增殖的作用。
　　 巨噬細胞釋放NO模型結(jié)果顯示：揮發(fā)油及大孔樹脂60％乙醇洗脫部位能

4、明顯抑制腹腔巨噬細胞分泌NO。
　　 3.桂枝茯苓膠囊活性部位的成分分析
　　 效應(yīng)評價研究結(jié)果表明，桂枝茯苓膠囊揮發(fā)性部位，大孔樹脂40％乙醇洗脫部位、60％乙醇洗脫部位均存在效應(yīng)物質(zhì)，因此對這些有效部位進行了進一步化學(xué)成分分析鑒定。
　　 GC-MS分析結(jié)果表明：揮發(fā)油部位主要成分為桂皮醛，肉桂酸，丹皮酚。
　　 LC-MS分析大孔樹脂40％乙醇洗脫部位、60％乙醇洗脫部位結(jié)果表明：其主要成分為沒食子

5、酸、1，2，3，4，6-O-五沒食子酰葡萄糖，苦杏仁苷，芍藥苷，芍藥內(nèi)酯苷，芍藥新苷等。
　　 4.效應(yīng)部位中各成分的活性驗證
　　 根據(jù)上述研究結(jié)果，對已鑒定的化合物進行了活性驗證。證實桂皮醛、芍藥苷等具有抑制小鼠離體子宮原發(fā)性痛經(jīng)模型收縮的活性；沒食子酸、芍藥苷、肉桂酸、桂皮醛、苦杏仁苷、苯甲酸能明顯抑制卵巢顆粒細胞增殖，1，2，3，4，6-O-沒食子酰葡萄糖能明顯促進卵巢顆粒細胞增殖：丹皮酚、芍藥苷、芍藥新苷、苦杏

6、仁苷、苯甲酸能明顯抑制大鼠腹腔巨噬細胞過度分泌NO。
　　 二、桂枝茯苓膠囊治療原發(fā)性痛經(jīng)的機制研究
　　 1.桂皮醛抑制小鼠離體子宮痛經(jīng)模型收縮的機制研究
　　 本研究通過考察桂皮醛對各種子宮平滑肌激動劑及KC1誘導(dǎo)的子宮平滑肌的影響，初步確定了其作用機制是通過抑制細胞外Ca2+內(nèi)流及細胞內(nèi)Ca2+庫的釋放，而對于去極化引起的細胞外Ca2+內(nèi)流無明顯影響；同時應(yīng)用熒光酶標(biāo)儀考察了桂皮醛對平滑肌氧化應(yīng)激產(chǎn)生的痙攣

7、的影響，結(jié)果顯示桂皮醛能部分拮抗并抑制細胞內(nèi)Ca2+濃度提高。
　　 2.桂皮醛、芍藥苷對凝血酶誘導(dǎo)子宮平滑肌細胞增生的影響
　　 本研究通過考察桂皮醛、芍藥苷對凝血酶誘導(dǎo)子宮平滑肌細胞增生的影響，發(fā)現(xiàn)桂皮醛、芍藥苷具有明顯抑制凝血酶誘導(dǎo)的平滑肌增生作用。
　　 3.桂皮醛、芍藥苷對子宮平滑肌損傷的保護作用
　　 本研究建立了子宮平滑肌的氧化損傷及低溫?fù)p傷模型，考察桂皮醛、芍藥苷對損傷平滑肌增殖的影響。結(jié)

8、果發(fā)現(xiàn)桂皮醛、芍藥苷能顯著促進平滑肌增殖并減少活性氧誘導(dǎo)的平滑肌細胞凋亡。
　　 4.有效部位中不同成分配伍對活性的影響
　　 本研究以桂皮醛、芍藥苷為主要成分，考察它們與其他成分配伍后對活性影響。結(jié)果顯示：芍藥苷能提高桂皮醛抑制小鼠離體子宮收縮效應(yīng)，苯甲酰芍藥苷能明顯提高芍藥苷抑制小鼠離體子宮收縮效應(yīng)，顯示具協(xié)同作用。
　　 三、桂枝茯苓膠囊效應(yīng)成分的藥代動力學(xué)研究
　　 根據(jù)以上研究結(jié)果及已有實驗基礎(chǔ)