桉樹EST-CAPS標(biāo)記的開發(fā)及其用于遺傳圖譜構(gòu)建的研究.pdf

1、遺傳圖譜構(gòu)建是當(dāng)前植物遺傳研究的熱點(diǎn)，但林木遺傳圖譜構(gòu)建中存在密度較低、共顯性標(biāo)記不多、基于功能基因的標(biāo)記缺乏等問題，如何開發(fā)共顯性的、基于功能基因的分子標(biāo)記并用于林木遺傳圖譜構(gòu)建是急需解決的問題。桉樹在全球范圍內(nèi)是重要的造林樹種，也是林木遺傳研究的模式樹種，其遺傳圖譜構(gòu)建具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。 利用從GeneBank下載的細(xì)葉桉54條EST序列，進(jìn)行了引物設(shè)計(jì)利PCR擴(kuò)增條件優(yōu)化，有35對(duì)引物能成功進(jìn)行PCR擴(kuò)增。利用

2、30種限制性內(nèi)切酶對(duì)可成功PCR擴(kuò)增的35個(gè)EST序列在尾葉桉×細(xì)葉桉F1作圖譜系的多態(tài)性進(jìn)行了篩選，分析了EST-CAPS標(biāo)記的分離方式，并將多態(tài)性的EST-CAPS標(biāo)記整合到尾葉桉和細(xì)葉桉的RAPD遺傳圖譜上。 分離方式研究中，有7個(gè)EST序列可用合適的限制性內(nèi)切酶酶切并在作圖譜系中產(chǎn)生多態(tài)性，即產(chǎn)生EST-CAPS標(biāo)記，其中5個(gè)EST-CAPS標(biāo)記呈1∶1的分離，包括1個(gè)偏離孟德爾分離(α=0.05)；另外2個(gè)EST-CA

3、PS標(biāo)記呈1∶1∶1∶1的分離，且均符合孟德爾分離。孟德爾正態(tài)分離的EST-CAPS標(biāo)記比例達(dá)85.7％，偏分離標(biāo)記比例為14.3％，表明EST-CAPS標(biāo)記是一種可靠的遺傳標(biāo)記，可用于桉屬樹種遺傳圖譜構(gòu)建和相關(guān)研究。 在分離方式研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行了遺傳圖譜構(gòu)建的研究，運(yùn)用作圖軟件Mapmaker3.0將EST-CAPS標(biāo)記整合到已構(gòu)建的RAPD遺傳圖譜上，結(jié)果表明：3個(gè)EST-CAPS標(biāo)記分別整合到尾葉桉的第1、11和15連鎖群

4、上，標(biāo)記EST-CD668626與3個(gè)原RAPD標(biāo)記組成新的連鎖群，基于RAPD-CAPS的尾葉桉新圖譜包含24個(gè)連鎖群，新增連鎖群1個(gè)，總遺傳圖距1546.1cM，標(biāo)記間的平均距離為10.8cM。另有1個(gè)偏分離標(biāo)記未能連鎖到任何連鎖群上。整合4個(gè)EST-CAPS標(biāo)記后的細(xì)葉桉新圖譜總遺傳圖距1122.5cM，分布于23個(gè)連鎖群上，標(biāo)記間的平均距離為10.2cM。4個(gè)標(biāo)記分布于第6、7、8和第10連鎖群上?；赗APD-CAPS的尾葉桉