PTHrP調(diào)節(jié)乳腺癌生長及癌細胞與骨細胞相互作用研究.pdf

1、分類密學位類別：科學學位團專業(yè)學位口學校代碼：學號：學科門類：100622010601037100102昊肄簣斜囊等鬻萋纛瓣鹱i辯熊蘩豢l蠡#鼉I耄謦鼗瓣l糕萋鬟蒸l科博士學位論文DoCToRALDISSERTATIoN論文題目：PTHrP調(diào)節(jié)乳腺癌生長及癌細胞與骨細胞相互作用研究TITLERoleoftumorderivedPTHrPinbreastcancergrowthandprogressionandtumormediatedo

2、steoblastinhibitionandosteoclastactivationandbonedestruction一級學科：基礎(chǔ)醫(yī)學二級學科：免疫學論文作者：鄭璐指導教師：姚智導師組成員：肖國芝天津醫(yī)科大學研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學博士學位論文中文捅要乳腺癌是一種常見的、高發(fā)的惡性腫瘤，在女性惡性病發(fā)病率中排名第一位，是導致全球女性死亡的主要原因；經(jīng)研究表明，在全球范圍內(nèi)，每年約有50萬新增病例，約有25萬人死于乳腺癌。乳

3、腺癌在其發(fā)生的初期階段，往往只單純的表現(xiàn)為細胞的過度增殖及凋亡的異常減少，最終導致腫瘤的快速生長；在其發(fā)生發(fā)展的晚期階段，轉(zhuǎn)移成為導致病人死亡的一個最重要的因素，而骨是乳腺癌轉(zhuǎn)移中最常見的靶器官。PTHrP是從高鈣血癥相關(guān)的惡性腫瘤組織中分離出來的一種蛋白質(zhì)，由于其結(jié)構(gòu)及功能與甲狀旁腺激素PTH相類似而得名；多項研究表明PTHrP在乳腺癌微環(huán)境中呈現(xiàn)過度表達的狀態(tài)，它通過上調(diào)骨組織中成骨細胞及基質(zhì)細胞RANKL的表達，抑制0PG的表達，

4、RANKL與破骨細胞RANK結(jié)合從而間接激活破骨細胞，誘導其分化成熟；PTHrP在腫瘤溶骨性骨轉(zhuǎn)移及骨破壞的發(fā)生發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用，同時也有報道稱其與乳腺癌的預后有一定的關(guān)聯(lián)性。研究目的探討乳腺癌細胞自身產(chǎn)生的細胞因子PTHrP對成骨細胞增殖與分化的影響；對破骨細胞增殖及分化的影響；對腫瘤細胞自身增殖，凋亡及自噬作用的影ⅡI匈。研究內(nèi)容及方法本課題采用慢病毒包裝的shRNA感染乳腺癌細胞系MDA—MB一231并用嘌呤霉素篩選的

5、方法，通過RTPCR及E1isa檢測，得到穩(wěn)定敲降PTHrP的細胞株995，996以及陰性對照組細胞NC。體外通過成骨分化標志分子OCN／OSX／Runx2／ALP／BSP相對表達量檢測，破骨分化標志分子CatK／RANK／Trap／MMP一9相對表達量檢測，ALP活性檢測，茜素紅礦化染色，Trap染色等方法，觀察NC，995，996三種細胞的條件培養(yǎng)基對成骨細胞及破骨細胞增殖及分化影響的差別；體內(nèi)通過影像學X射線平片，免疫組化等檢測手

6、段，觀察Balb／C裸鼠脛骨內(nèi)注射NC，995，996三種細胞以及空白對照Blank28天后對成骨細胞及破骨細胞影響的差別；體外通過流式細胞周期分析，細胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase8／bcl2相對表達量檢測，細胞自噬標志蛋白LC3A／B／Beclinl相對表達量檢測，透射電鏡，CCK一8法細胞增殖曲線檢測等方法，觀察NC，995，996三種細胞體外增殖，凋亡及白噬作用的差異；體內(nèi)通過NC，995，996三種細胞Balb／C裸鼠皮下成瘤瘤