抗鼻咽癌中草藥的篩選和鹽酸千金藤堿對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：通過(guò)兩種途徑對(duì)中草藥的抗鼻咽癌作用進(jìn)行初步篩選：一、采用血清藥理學(xué)方法制備中草藥的含藥血清，在體外用MTT法對(duì)含藥血清的抗鼻咽癌作用進(jìn)行篩選；二、在體外用MTT法直接對(duì)中草藥的提取物進(jìn)行抗鼻咽癌作用的篩選。篩選實(shí)驗(yàn)顯示半枝蓮、腫節(jié)風(fēng)等的含藥血清和茶多酚、薏苡仁的提取物在體外可以有效抑制鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。簽于資料顯示青蒿、千金藤在抗腫瘤方面的作用，分別通過(guò)同樣的兩種途徑對(duì)青蒿含藥血清和千金藤的提取物(鹽酸千金藤堿)在體外用MTT法進(jìn)

2、行了抗鼻咽癌作用的初步篩選，并對(duì)鹽酸干金藤堿對(duì)鼻咽癌癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及其作用機(jī)制進(jìn)行了探討。 方法：(1)采用MTT法檢測(cè)鹽酸千金藤堿和含青蒿血清在體外鼻對(duì)咽癌細(xì)胞CNE-1、CNE-2、5-8F、SUNE-1的生長(zhǎng)抑制作用，篩選抗鼻咽癌中草藥；(2)鹽酸千金藤堿處理的人鼻咽癌CNE-1、CNE-2、5-8F、SUNE-1細(xì)胞株后，采用ATP法對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞活力測(cè)定、流式細(xì)胞術(shù)分析其細(xì)胞周期及透射電鏡觀察其細(xì)胞形態(tài)；(3)采用

3、基因芯片技術(shù)檢測(cè)鹽酸千金藤堿處理前后CNE-2細(xì)胞的基因表達(dá)譜改變；用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)部分基因芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證；(4)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。 結(jié)果：(1) MTT法發(fā)現(xiàn)青蒿對(duì)CNE-1、5-8F、SUNE-1、CNE-2細(xì)胞的抑制作用不明顯；鹽酸千金藤堿對(duì)四株鼻咽癌細(xì)胞的抑制作用較明顯，并且在CNE-1、5-8F、SUNE-1且呈劑量.效應(yīng)關(guān)系和時(shí)間.效應(yīng)關(guān)系，在CNE-2成劑量-效應(yīng)關(guān)系；(2)

4、ATP法發(fā)現(xiàn)鹽酸千金藤堿對(duì)四株鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，其效應(yīng)關(guān)系同MTT結(jié)果；流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)鹽酸千金藤堿處理四株鼻咽癌細(xì)胞后細(xì)胞周期停滯于G0/G1期，并可見(jiàn)凋亡峰；透射電鏡可見(jiàn)四株鼻咽癌細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變；(3)基因芯片檢測(cè)得到138個(gè)上調(diào)基因和63個(gè)下調(diào)基因。依據(jù)其生物學(xué)功能可以分為細(xì)胞增殖相關(guān)基因、細(xì)胞周期相關(guān)基因、細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因、DNA修復(fù)基因等。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)部分基因進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果與基因芯片結(jié)果相符

5、。 結(jié)論：(1)鹽酸千金藤堿(千金藤的提取物)在體外可以有效的抑制鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)；青蒿在體外對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的影響；(2)鹽酸千金藤堿在體外將CNE-1、CNE-2、5-8F、SUNE-1細(xì)胞阻滯于G0/G1期，使細(xì)胞增殖受到抑制；(3)鹽酸千金藤堿在體外可誘導(dǎo)CNE-1、CNE-2、5-8F、SUNE-1凋亡，可有效抑制其生長(zhǎng)；(4)鹽酸千金藤堿可以誘導(dǎo)CNE-2細(xì)胞201(138個(gè)上調(diào)，63個(gè)下調(diào))基因的差異表達(dá)