沖擊波對骨愈合過程中骨痂生成及VEGF和bFGF蛋白表達的影響.pdf

1、目的：研究體外沖擊波對骨折愈合過程中骨痂生成及對血管內皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)蛋白表達的影響，以探討體外沖擊波促進骨折愈合的機理，為沖擊波治療骨折提供一定的理論和實驗依據，使體外沖擊波在骨科領域得到更廣泛的應用，為此進行本課題的研究。 方法：選用健康新西蘭大白兔60只(健康，體重2.75±0.25 kg，普通級，年齡 118天±5天，雌雄不限，山東米歇爾生物公司提供，合格證號 20030011；

2、標準清潔級動物房飼養(yǎng))，隨機分為6組(3 d、1周、2周、3周、4周和6周)，每組 10只，制造雙側橈骨骨折模型，左側為對照側，右側為沖擊波治療側(14 kv，2000 次)。分別于術后1、2、4和6周進行X線攝片，分析軟件評價兩側骨痂形成量百分比：于術后3 d、1周、2周、3周、4周和6周進行取材行病理檢查，觀察骨愈合情況，軟件分析骨痂生成量百分比。術后3 d、1周、2周、3周、4.周和6周做免疫組化染色檢測VEGF和bFGF蛋白的表

3、達水平，軟件分析蛋白表達陽性指數。對檢測結果進行統(tǒng)計學分析，所有數據以均數±標準差表示，應用SAS8.1統(tǒng)計軟件進行數據分析。主效應和交互效應分析用配對析因分析；單獨效應分析中，每個時間點兩組的比較用配對t檢驗，每組各時間點的比較用 one-way ANOVA 及 LSD多重比較方法。 結果：1、不同時間 X 線檢測兩側骨痂形成量百分比進行統(tǒng)計學分析顯示，在術后 1、2、4、6周對照側和治療側骨痂生成量都隨時間的延長明顯增加，并

4、且沖擊波治療側骨痂生成量多于對照側 (t=5.525641，P=0.0004：t=4.232911，P=0.0022；t=12.01248，P<0.0001；t=10.14185，P<0.0001)。 2.病理檢查：術后4周骨痂生成量百分比統(tǒng)計學分析顯示在骨折區(qū)治療側纖維組織、纖維軟骨組織和軟骨明顯少于對照側，差異有顯著性意義(t=18.13，P<0.0001；t=11.10，P<0.0001：t=20.68，P<0.0001)

5、；而皮質骨生成量治療側明顯多于對照側，差異有顯著性意義(t=-12.53，P<0.0001)。術后6周骨痂生成量百分比統(tǒng)計學分析顯示在骨折區(qū)治療側的纖維軟骨組織、軟骨和編織骨明顯少于對照側，差異有顯著性意義 (t=11.16，P<0.0001；t=11.90，P<0.0001；t=7.82，P<0.0001)；而皮質骨生成量治療側明顯多于對照側，差異有顯著性意義(t=-3.51，P=0.0066)。 3、不同時間VEGF蛋白的

6、檢測：實驗顯示在術后3 d直至6周治療側和對照側骨折區(qū)內都發(fā)現(xiàn)了VEGF的表達。細胞定位研究顯示在骨愈合的不同時期，多種細胞參與了VEGF的合成，在早期主要見于骨折端骨細胞的胞漿。以后纖維母細胞、血管內皮細胞、成骨細胞、軟骨內成骨區(qū)的軟骨細胞、新生骨細胞、破骨細胞先后出現(xiàn)陽性反應，且分泌 VEGF 的細胞主要集中在新生血管周圍。免疫組化陽性指數表明，VEGF 的表達于術后3 d開始增強，術后3周左右達到高峰，之后開始逐漸下降。免疫組化顯

7、示在早期骨折端骨細胞染色強度明顯高于對照側，陽性指數顯示在術后 1周、2 周、3周沖擊波治療側大于對照側，差異有顯著性意義(t=-5.37，P=0.0005；t=-5.56，P=0.0004；t=-3.70，P=0.0049)。 4、不同時間兩組bFGF蛋白的檢測：實驗表明骨折后3 d，bFGF即在骨折端的成纖維細胞和血管內皮細胞的胞漿中有較強的表達，免疫組化陽性指數顯示，bFGF的表達于術后3 d開始增強，術后2w左右達到高峰