番紅花球莖蛋白聚糖抗腫瘤研究及其在愈傷組織中的誘導(dǎo).pdf

1、惡性腫瘤一直是全世界人類的主要致死原因，每年剝奪超過600萬人的生命?；熓悄壳爸委煇盒阅[瘤的主要手段之一。雖然國內(nèi)外抗腫瘤藥眾多，但是大多數(shù)藥物都伴隨著嚴(yán)重的毒副作用，因此繼續(xù)尋找高效低毒的新型抗腫瘤藥物成為研究的熱點(diǎn)。從中藥活性成份中篩選治療癌癥的藥物是目前本領(lǐng)域研究的一個(gè)重要方面。
　　 本研究采用50 mM，pH8.0的三羥甲基氨基甲烷.鹽酸緩沖液(Tris-HCI)，其中含有1 mM的苯甲基磺酰氟(PMSF)、5 mM

2、的二硫蘇糖醇(DTT)對番紅花(Crocus sativus L.)球莖中的多糖進(jìn)行提取，經(jīng)DEAE柱層析和反相HPLC，純化得到了一個(gè)單一的多糖組分。硫酚法和Folin-酚法結(jié)果表明該多糖中糖和蛋白質(zhì)分別為94.88％和5.12％，該多糖屬于蛋白聚糖(proteoglycan，PG)。PMP衍生法和間羥聯(lián)苯法，檢測結(jié)果表明該蛋白聚糖是一個(gè)雜聚多糖，主要由鼠李糖(28.03％)，半乳糖(13.14％)，巖藻糖(8.20％)，木糖(19.

3、31％)，甘露糖(23.40％)和糖醛酸(7.92％)組成。氨基酸自動(dòng)分析儀結(jié)果表明該蛋白聚糖的蛋白質(zhì)部分主要由Asp，Glu，Gly，Ala和Leu等5種氨基酸組成(占50％以上)。FTIR和13C核磁共振結(jié)果證明該蛋白聚糖具有典型的多糖和蛋白的結(jié)構(gòu)官能團(tuán)，并確定其主鏈可能為β-(1，4)-D甘露糖，側(cè)鏈包括β-(1，6)-D甘露糖及其他種類單糖，如鼠李糖等。
　　 蛋白聚糖的體內(nèi)外抗腫瘤作用進(jìn)行了初步研究。SRB法體外毒性試

4、驗(yàn)結(jié)果表明，該蛋白聚糖對腫瘤細(xì)胞具有強(qiáng)烈的體外殺傷作用，對人肺癌A549細(xì)胞，人子宮頸癌Hela細(xì)胞，人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，人乳腺癌MCF7細(xì)胞，人胃癌SGC-7901細(xì)胞等5種人組織來源的腫瘤細(xì)胞和1種鼠源的肉瘤S180細(xì)胞的ICso在10-40μg/ml之間。進(jìn)一步的研究表明，該蛋白聚糖(PG)引起的細(xì)胞毒性機(jī)理在于：PG減少S180細(xì)胞的胞內(nèi)活性氧含量(ROS)，將細(xì)胞周期阻滯在GO/G1期，隨后發(fā)生細(xì)胞凋亡，引起細(xì)胞膜結(jié)

5、構(gòu)完整性的變化，最終導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。利用建立的S180荷瘤小鼠模型，通過三種給藥方式(腹腔注射給藥，靜脈注射給藥和瘤內(nèi)注射給藥)連續(xù)給藥10天，觀察20天內(nèi)，蛋白聚糖對小鼠體重、瘤體積的影響，20天后處死小鼠，取出瘤塊，計(jì)算抑瘤率，結(jié)果表明3種給藥方式都具0.4mg kg-1day-1被推薦為以后研究的手段。
　　 本研究建立了番紅花球莖愈傷組織誘導(dǎo)體系，確定其最佳的培養(yǎng)條件為：球莖芽點(diǎn)周圍表皮為外植體，在MS+5.0 mg/L