化纖湯對肺纖維化大鼠肺組織細(xì)胞外基質(zhì)代謝的干預(yù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的：肺纖維化的發(fā)病率有逐年增高趨勢，然而由于其病因和發(fā)病機(jī)制尚未闡明，迄今尚無特效療法，病死率高，成為嚴(yán)重威脅人類健康的難治性疾病。臨床表明，中醫(yī)藥治療不僅能有效改善癥狀，提高患者的生存質(zhì)量，而且可以極大降低本病的死亡率，因此，總結(jié)和探討肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)藥治療具有很大的必要性和現(xiàn)實(shí)意義?；w湯是根據(jù)肺間質(zhì)纖維化的基本病機(jī)特點(diǎn)所擬定的基本方，以益氣通陽、行氣活血化痰為治法，在臨床上以該方為基本方治療各期肺間質(zhì)纖維化取得顯著療效。本課題

2、以博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化為模型，以影響細(xì)胞外基質(zhì)代謝的細(xì)胞因子和基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)為主要切入點(diǎn)，觀察化纖湯對肺組織病理形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的影響、對基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制劑表達(dá)的影響、細(xì)胞因子PDGF、TGFβ1含量的影響以及肺組織HYP含量的影響來進(jìn)行研究，目的是通過動物實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證和客觀評價化纖湯的療效，并探究其可能的作用途徑和機(jī)制。 方法：144只健康Wistar大鼠，體重200±20g，隨機(jī)分為六組：正常對照組、模型對照

3、組、強(qiáng)的松組、中藥大劑量組、中劑量組和小劑量組，每組24只。除正常對照組外，其他五組均采用經(jīng)氣管滴注博萊霉素(BLM)建立大鼠肺纖維化模型，造模后第二日起化纖湯大、中、小劑量組每天用化纖湯(2g/ml、1g/ml、0.5g/ml)灌胃，強(qiáng)的松組用醋酸強(qiáng)的松混懸液(0.32mg/ml)灌胃，正常對照組與模型組生理鹽水灌胃，每日一次，劑量為10ml/kg·bw。每組分別于第7、14和28天隨機(jī)處死8只，HE染色及光鏡、電鏡觀察大鼠肺組織顯微

4、及超微結(jié)構(gòu)的病理形態(tài)學(xué)變化；觀察大鼠肺系數(shù)變化；運(yùn)用免疫組織化學(xué)分析法檢測大鼠肺組織MMP-9及 TIMP-1表達(dá)的變化；運(yùn)用ELISA法檢測大鼠血清中細(xì)胞因子PDGF及TGFβ1含量的變化；運(yùn)用樣本堿水解法檢測肺組織羥脯氨酸含量的變化；運(yùn)用RT-PCR法觀察大鼠肺組織MMP-2mRNA表達(dá)的變化；以及化纖湯對上述各項(xiàng)指標(biāo)的影響。 結(jié)果： (1)化纖湯可明顯降低實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠肺系數(shù)(P<0.01)，化纖湯大劑量組作用

5、優(yōu)于小劑量組(P<0.05)，強(qiáng)的松組、化纖湯大、中劑量組三組間差異無顯著性意義(P>0.05)；肺組織病理形態(tài)光鏡和超微結(jié)構(gòu)的電鏡觀察表明，強(qiáng)的松組、化纖湯大、中、小劑量組與模型組相比病理改變均有不同程度改善，各組間肺泡炎的差異具有顯著性(P<0.01 或0.05)，由重到輕排序?yàn)槟Ｐ徒M，化纖湯小劑量組，化纖湯中劑量組，強(qiáng)的松組，化纖湯大劑量組，正常組；各組間肺纖維化的差異具有顯著性(P<0.01或0.05)，纖維化程度排序由重到輕依

6、次為模型組，強(qiáng)的松組，化纖湯小劑量組，化纖湯中劑量組，化纖湯大劑量組，正常對照組； (2)與正常對照組比較，模型對照組大鼠第7、14、28天時肺組織中 MMP-9、TIMP-1陽性細(xì)胞率均明顯升高(P<0.01)，與模型對照組大鼠相比，強(qiáng)的松組、化纖湯大、中、小劑量組肺組織中MMP-9、TIMP-1陽性細(xì)胞率均明顯降低(P<0.01或0.05)，組間比較發(fā)現(xiàn)，在三個時間點(diǎn)化纖湯大劑量組MMP-9陽性細(xì)胞率與強(qiáng)的松組無顯著差異(P

7、>0.05)，但與中、小劑量組相比差異顯著(P<0.05)；TIMP-1 陽性細(xì)胞率第7天時，強(qiáng)的松組、化纖湯大、中、小劑量組間無顯著性差異(P>0.05)，第14天時，大劑量組與小劑量組間有顯著性差異(P<0.05)，第28天時，大、中劑量組間差異無顯著性(P>0.05)，但均明顯低于小劑量組(P<0.05)； (3)與正常對照組相比，模型對照組PDGF、TGFβ1含量在各時間點(diǎn)均顯著增加(P<0.01)，強(qiáng)的松組、化纖湯大、

8、中、小劑量組在各時間點(diǎn)上 PDGF、TGFβ1的含量比正常對照組明顯增加(P<0.01)，但顯著低于模型對照組(P<0.01)，化纖湯各組間比較，各時間點(diǎn)大、小劑量組間PDGF含量的差異具有顯著意義(P<0.05)；第7天時，大、小劑量組間 TGFβ1 含量的差異具有顯著意義(P<0.05)，第14天和第28天時，大劑量組與中、小劑量組TGFβ1含量的差異均具有顯著意義(P<0.05)； (4)與正常對照組比較，模型對照組各時間

9、點(diǎn)肺組織羥脯氨酸含量均明顯升高，特別是在第28天達(dá)到高峰，在各時間點(diǎn)上，強(qiáng)的松組和化纖湯各組HYP含量均明顯高于正常對照組(P<0.01)，但顯著低于同期模型對照組(P<0.01)，組間比較，第7、14天時化纖湯各組間差異無顯著意義(P>0.05)，第28天時，化纖湯大劑量組與小劑量組比較具有顯著差異(P<0.05)； (5)各實(shí)驗(yàn)組在第7天、第14天、第28天三個時間點(diǎn)均有MMP-2mRNA的表達(dá)，與正常對照組相比，模型對照組

10、第7天含量顯著升高(P<0.01)，第14天時達(dá)到高峰，第28天雖較第7、14天時有所降低，但仍明顯高于同期正常對照組(P<0.01)，與模型對照組比較，強(qiáng)的松和化纖湯各組各時間點(diǎn)含量均明顯降低(P<0.01)，化纖湯各組間比較，大劑量組在三個時間點(diǎn)MMP-2mRNA的表達(dá)均明顯低于小劑量組(P<0.05)。 結(jié)論：化纖湯對博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化具有一定的防治作用，這一作用可能是通過以下途徑實(shí)現(xiàn)的：降低肺組織MMP-9、TI