柳葉蠟梅提取物抑制HeLa細(xì)胞生長及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、柳葉蠟梅是畬鄉(xiāng)民間應(yīng)用最廣泛的中草藥之一，民間用于腸胃不適及腹部脹痛等消化道疾病，現(xiàn)已被開發(fā)成山蠟梅葉顆粒和脾胃舒膠囊及保健茶等。脾胃舒膠囊在臨床觀察中發(fā)現(xiàn)對部分癌癥化療時的輔助治療臨床效果明顯，因此我們推測柳葉蠟梅具有抗腫瘤作用。
　　 研究目的：研究柳葉蠟梅提取物對人宮頸癌HeLa細(xì)胞的生長抑制作用，從細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡兩方面來考察細(xì)胞生長抑制及其可能機制。
　　 研究方法：應(yīng)用噻唑藍(lán)(MTT)比色法、流式細(xì)胞定量檢

2、測、透射電鏡、Hoechst33258/PI染色、DNA電泳、RT-PCR.和Western印跡檢測等技術(shù)研究柳葉蠟梅提取物對HeLa細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期分布、凋亡以及p21mRNA水平和蛋白表達變化的情況。
　　 研究結(jié)果：(1)細(xì)胞生長抑制實驗結(jié)果顯示：a)溶劑吐溫-80對HeLa細(xì)胞的生長作用影響不大，與空白對照組比較無顯著性差異(P>0.05)；b)柳葉蠟梅提取物可明顯抑制HeLa細(xì)胞生長，隨著藥物濃度的增加，呈劑量依賴

3、性；c)柳葉蠟梅提取物對FL細(xì)胞生長抑制作用較小，與HeLa細(xì)胞的存活率相比具有顯著性差異；d)柳葉蠟梅含藥血清對HeLa細(xì)胞的增殖有抑制作用；(2)細(xì)胞周期檢測顯示柳葉蠟梅提取物可阻滯HeLa細(xì)胞于G2/M期；(3)透射電鏡觀察顯示，藥物處理組細(xì)胞表面微絨毛減少、染色質(zhì)濃縮邊集，并見凋亡小體；(4)細(xì)胞核經(jīng)Hoechst33258染色顆粒狀熒光，而Pl染色無紅色熒光，即無壞死現(xiàn)象；(5)瓊脂糖凝膠電泳顯示細(xì)胞凋亡典型的DNA ladd