葡萄籽原花青素對骨髓間充質(zhì)干細胞誘導分化后神經(jīng)元樣細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：探討葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins，GSP)對骨髓間充質(zhì)干細胞(bonemarrow messenehymal stem cells，BMSCs)誘導分化后神經(jīng)元樣細胞是否具有抗凋亡作用及作用的最適劑量。
　　 方法：BMSCs由成年健康雄性WISTAR大鼠股骨全骨髓法取得，經(jīng)貼壁培養(yǎng)法分離純化，取第五代BMSCs用低中高劑量(20mg/L、40mg/L、80mg/L)GSP干預2

2、4 h，設(shè)立空白對照組。以含有20％胎牛血清的1mmol/LB-巰基乙醇(BME)預誘導24 h后，繼而用含有40ng/mL堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的無血清培養(yǎng)基作為誘導液誘導24 h。采用免疫細胞化學法鑒定神經(jīng)細胞特異性抗原標記神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuronspecificenolase，NSE)和微管相關(guān)蛋白-2(microtubule-associated protein2，MAP-2)的表達。MTT法檢測不同劑量的

3、GSP干預24 h后對神經(jīng)元樣細胞活力的影響，流式細胞儀檢測以Fluo-3 AM為熒光探針標記的細胞內(nèi)游離鈣濃度，以Annexin V凋亡試劑盒檢測組間細胞凋亡率。
　　 結(jié)果：成功分離培養(yǎng)WISTAR大鼠BMSCs，經(jīng)誘導分化后大部BMSCs變成神經(jīng)元樣細胞并表達NSE和MAP-2。GSP干預組細胞生長狀態(tài)，活力及存活細胞比例較好。
　　 結(jié)論：GSP能使BMSCs誘導分化后神經(jīng)元樣細胞保持較好的活力，對抗自由基產(chǎn)生，