卵泡刺激素及戊酸雌二醇對小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的影響.pdf

1、背景及目的：
　　 未成熟卵體外成熟培養(yǎng)技術(shù)(in vitro maturation，IVM)是指不經(jīng)超促排卵或應(yīng)用少量促性腺激素(gonadotropin，Gn)，從卵巢中獲取未成熟卵，經(jīng)過適宜的條件進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)，使卵子成熟達(dá)到減數(shù)分裂中期(MetaphaseⅡ，MⅡ)并具備受精能力。在臨床上，部分行體外受精患者的卵子取出后未達(dá)到MⅡ期，如果不對這些卵子進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)，則其全部不能受精，將給患者造成極大的經(jīng)濟(jì)損失和精神創(chuàng)

2、傷。另外，部分卵巢高反應(yīng)患者(如多囊卵巢綜合癥患者)因?qū)n敏感，促排卵時易出現(xiàn)卵巢過度刺激綜合癥(ovary hyperstimulationsyndrome，OHSS)等嚴(yán)重并發(fā)癥。如果研究一個優(yōu)良的體外培養(yǎng)體系，可將體外受精周期取出的生發(fā)泡破裂期(germinal vesicle breakdown，GVBD)、減數(shù)分裂前期(MetaphaseⅠ，MⅠ)卵子經(jīng)體外成熟培養(yǎng)后再行體外受精，可減少取消周期，提高取卵周期的妊娠率。對卵巢

3、高反應(yīng)患者，則可以減少Gn的應(yīng)用及OHSS等嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生。雖然卵母細(xì)胞能夠在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中發(fā)育成熟并受精，胚胎移植后獲得成功妊娠，但其體外成熟率、受精率及妊娠率仍較低。近年來，為了提高未成熟卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)的成熟率和質(zhì)量，大量學(xué)者致力于研究在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中添加各種物質(zhì)，希望可以改善培養(yǎng)微環(huán)境進(jìn)而促進(jìn)未成熟卵母細(xì)胞的體外成熟。卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)是卵泡發(fā)育必須的激素，在卵泡發(fā)育

4、晚期，雌二醇與卵泡刺激素有協(xié)同作用，因此許多學(xué)者研究在卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)系統(tǒng)中添加卵泡刺激素及雌二醇來促進(jìn)卵母細(xì)胞的體外成熟，但其添加濃度尚無定論。本實驗研究卵泡刺激素、戊酸雌二醇對小鼠未成熟卵母細(xì)胞體外成熟、受精及卵裂能力的影響。選擇最適的卵泡刺激素、戊酸雌二醇濃度，優(yōu)化IVM培養(yǎng)體系。
　　 材料與方法
　　 1.研究對象
　　 8～12周齡雌性昆明小白鼠30只，體重25～30克，用于獲取未成熟卵母細(xì)胞；14～

5、18周齡雄性昆明小鼠15只，體重35～40克，用于獲取精子。
　　 2.研究方法
　　 對處于動情前期的雌性小鼠進(jìn)行超促排卵，48小時后頸椎脫臼法處死小鼠，取出雙側(cè)卵巢，在解剖顯微鏡下用4號半注射器針頭刺破半透明的卵泡，收集未成熟卵母細(xì)胞。將收集到的形態(tài)較好的未成熟卵母細(xì)胞隨機分為6組，在不添加激素的基礎(chǔ)培養(yǎng)液中以及分別添加10IU/ml FSH、50IU/ml FSH、1μg/ml戊酸雌二醇、10μg/ml戊酸雌二醇、

6、100μg/ml戊酸雌二醇的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時后，觀察各組卵母細(xì)胞的成熟情況。對已成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精，觀察卵母細(xì)胞受精情況。受精后繼續(xù)培養(yǎng)48～72小時，觀察其卵裂情況。比較各組的成熟率、受精率和卵裂率。
　　 3.統(tǒng)計學(xué)方法
　　 應(yīng)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果以百分率表示，率的比較采用x2檢驗。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.各濃度FSH組及各濃度戊酸雌二

7、醇組與對照組相比，成熟率(GVBD率、MⅡ率)及卵裂率的差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2.10IU/ml FSH組、50IU/ml FSH組以及10μg/ml戊酸雌二醇組的受精率分別為41.18％、40％、42.86％，均顯著高于對照組(19.44％)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；1μg/ml戊酸雌二醇組、100μg/ml戊酸雌二醇組與對照組相比，受精率的差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
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