2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、達(dá)盧生坦(darusentan, LU135252)化學(xué)名為(+)-(S)-2-[(4,6-二甲氧基嘧啶)-2-氧基]-3-甲氧基-3,3-二苯基丙酸,為選擇性內(nèi)皮素受體拮抗劑,單獨(dú)用藥可顯著降低Ⅱ級(jí)高血壓患者的血壓,與其他降壓藥物聯(lián)用可有效降低頑固性高血壓患者的血壓。目前達(dá)盧生坦外消旋體的手性拆分未見報(bào)道,為了實(shí)現(xiàn)對(duì)達(dá)盧生坦的質(zhì)量控制,本研究首次使用ES-OVM柱對(duì)達(dá)盧生坦外消旋體進(jìn)行手性拆分和含量測(cè)定。
   藥物的生物轉(zhuǎn)化

2、又稱為藥物代謝,本研究從體外代謝入手,進(jìn)行大鼠肝微粒體溫孵、微生物轉(zhuǎn)化,腸內(nèi)菌厭氧培養(yǎng),模擬體內(nèi)代謝過(guò)程,并盡可能的制備轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS)具有專屬、快速、靈敏等優(yōu)點(diǎn),是混合物中化學(xué)成分定性和定量分析的有力工具。本研究即采用HPLC-MS技術(shù),對(duì)大鼠尿液、糞便、膽汁、血漿和組織中的代謝物進(jìn)行分析,并對(duì)其結(jié)構(gòu)和代謝途徑進(jìn)行推斷。
   第一部分、達(dá)盧生坦外消旋體的HPLC法手性拆分及含量測(cè)定
 

3、  目的:建立HPLC法拆分外消旋達(dá)盧生坦對(duì)映體,并進(jìn)行含量測(cè)定。
   方法:采用ES-OVM柱(4.6mm×150mm,5μm),以30mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH3.35)-乙腈(60∶40)為流動(dòng)相,流速0.8ml/min,柱溫20℃,檢測(cè)波長(zhǎng)248nm。
   結(jié)果:建立了拆分外消旋達(dá)盧生坦對(duì)映體的HPLC方法,并進(jìn)行了含量測(cè)定。達(dá)盧生坦及其(R)-異構(gòu)體均在0.01~0.10mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良

4、好。平均回收率為99.6%和99.5%,RSD為0.75%和0.82%。最低檢測(cè)限1ng。
   第二部分、達(dá)盧生坦體外代謝研究
   目的:通過(guò)模擬體內(nèi)代謝過(guò)程的離體實(shí)驗(yàn)研究達(dá)盧生坦的體外代謝。應(yīng)用微生物轉(zhuǎn)化、腸道菌厭氧培養(yǎng)、肝微粒體溫孵等多種方法尋找達(dá)盧生坦的代謝物,并盡可能的制備轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
   方法:(1)微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn):HPLC法從12種真菌中篩選出對(duì)達(dá)盧生坦有轉(zhuǎn)化能力的菌株,色譜條件:反相C18柱,流

5、動(dòng)相為A(甲醇)-B(0.025%甲酸水),梯度洗脫:0-25min,10%A~70%A;25-55min,70%A~86%A;55-60min,86%A~98%A;60-70min,98%A;后運(yùn)行8min。柱溫為25℃,流速為1ml/min。分離制備代謝物,并對(duì)代謝物通過(guò)電噴霧離子源正離子和負(fù)離子模式進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜掃描、子離子掃描,對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行推斷。(2)腸道菌培養(yǎng):取大鼠糞便,利用文獻(xiàn)報(bào)道腸道菌厭氧培養(yǎng)的方法,研究達(dá)盧生坦的代謝。(

6、3)肝微粒溫孵實(shí)驗(yàn):根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的方法將達(dá)盧生坦加入微粒體溫孵液中,溫孵一定時(shí)間后,處理樣品并采用HPLC-DAD和多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)-信息依賴-增強(qiáng)型子離子掃描(MRM-IDA-EPI)模式分析體內(nèi)代謝生物樣品。根據(jù)產(chǎn)生的碎片離子信息推測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)。色譜條件:反相C18柱,流動(dòng)相為A(含0.05%甲酸的甲醇)-B(0.05%甲酸水)梯度洗脫:0-5min,20%A~60%A;5-20min,60%A~95%A;20-34min,95%A

7、;34-35min,95%A~20%A;后運(yùn)行8min,20%A。柱溫30℃,流速為0.8ml/min。質(zhì)譜條件:ESI源,源電壓5500V,正離子檢測(cè),源溫度(TEM)650℃,霧化氣(gas1)60 psi,加熱氣(gas2)65 psi,簾氣25 psi。
   結(jié)果:(1)微生物轉(zhuǎn)化試驗(yàn):經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)短刺小克銀漢霉(Cunninghamella blakesleana, AS3.970)對(duì)達(dá)盧生坦有代謝能力,重現(xiàn)性好但轉(zhuǎn)化

8、率低,無(wú)法大量制備,由一級(jí)質(zhì)譜掃描、子離子掃描推測(cè)該代謝物為達(dá)盧生坦的六碳糖結(jié)合物。(2)經(jīng)多次試驗(yàn),從腸道菌培養(yǎng)液中沒有發(fā)現(xiàn)明顯代謝物。(3)肝微粒體溫孵試驗(yàn):在SD大鼠和Wistar大鼠肝微粒體溫孵液中發(fā)現(xiàn)了達(dá)盧生坦代謝物,兩種屬大鼠代謝物沒有明顯差異,由HPLC-MS/MS法推測(cè)了代謝物結(jié)構(gòu)為2-[(4,6-二甲氧基嘧啶)-2-氧基]-3-羥基-3,3-二苯基丙酸。
   結(jié)論:通過(guò)微生物轉(zhuǎn)化法和肝微粒體溫孵試驗(yàn)各發(fā)現(xiàn)達(dá)盧

9、生坦一個(gè)代謝產(chǎn)物,并分別推測(cè)了代謝物的結(jié)構(gòu)。由于微生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)率較低,體外代謝試驗(yàn)未能制備得到達(dá)盧生坦代謝物。
   第三部分、達(dá)盧生坦體內(nèi)代謝研究
   目的:確認(rèn)達(dá)盧生坦的電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律,建立靈敏、有效的液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/MS)分析方法,尋找達(dá)盧生坦在大鼠體內(nèi)代謝物,并推測(cè)代謝物的結(jié)構(gòu)和代謝途徑。
   方法:以SD大鼠為對(duì)象,收集以達(dá)盧生坦灌胃后尿、糞便、血漿、膽汁、小腸、胃、肝、肺、腎、脾、心等生物

10、樣品。通過(guò)電噴霧離子源正離子和負(fù)離子模式進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜掃描、子離子掃描和母離子掃描,研究達(dá)盧生坦對(duì)照品的質(zhì)譜裂解途徑和規(guī)律,進(jìn)而聯(lián)合采用母離子掃描-信息依賴-增強(qiáng)型子離子掃描(PREC-IDA-EPI)和多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)-信息依賴-增強(qiáng)型子離子掃描(MRM-IDA-EPI)兩種模式分析體內(nèi)代謝生物樣品。根據(jù)兩種模式產(chǎn)生的碎片離子信息確定化合物的結(jié)構(gòu)。色譜條件:Waters Symmetry C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相

11、為A(含0.05%甲酸的甲醇)-B(0.05%甲酸水)梯度洗脫:0-5min,20%A~60%A;5-20min,60%A~95%A;20-34min,95%A;34-35min,95%A~20%A;后運(yùn)行8min,20%A;柱溫30℃,流速為0.8ml/min,進(jìn)樣量10μl。質(zhì)譜條件:ESI源,源電壓5500V,正離子檢測(cè),源溫度(TEM)650℃,霧化氣(gas1)60 psi,加熱氣(gas2)65 psi,簾氣25 psi。<

12、br>   結(jié)果:闡明了達(dá)盧生坦的質(zhì)譜裂解規(guī)律,據(jù)此推測(cè)達(dá)盧生坦在大鼠體內(nèi)的10種代謝產(chǎn)物。體內(nèi)生物樣品中除脾和心中沒有發(fā)現(xiàn)明顯的代謝物外,尿樣、糞便、膽汁、血樣、胃、小腸、肝、腎、肺均有所發(fā)現(xiàn)。
   結(jié)論:達(dá)盧生坦在大鼠體內(nèi)發(fā)生生物轉(zhuǎn)化,在膽汁中能檢測(cè)到10個(gè)代謝物,尿樣中也有6個(gè)明顯的代謝物,達(dá)盧生坦的主要代謝場(chǎng)所是肝臟,膽汁和尿是達(dá)盧生坦代謝物的重要排泄途徑。本法靈敏、準(zhǔn)確,能用于達(dá)盧生坦代謝物的檢測(cè)和結(jié)構(gòu)推測(cè),PRE

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