IGF-1R磷酸化調(diào)控Sox2表達(dá)影響胃癌干性功能及預(yù)后研究.pdf

1、第一部分：
　　目的：磷酸化胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體（P-IGF-1R）在腫瘤惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。同樣，它在維護(hù)腫瘤干細(xì)胞干性特征及細(xì)胞生存中也起著至關(guān)重要的作用。本研究的目的是探討P-IGF-1R和干細(xì)胞因子Sox2蛋白表達(dá)相關(guān)性及其在胃癌（GC）中表達(dá)的臨床意義。
　　方法：利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)P-IGF-1R和Sox2在227例行可切除胃癌的組織標(biāo)本中蛋白表達(dá)，并分析兩者表達(dá)的相關(guān)性。此外，結(jié)合患者的臨床

2、資料，分析P-IGF-1R和Sox2表達(dá)與患者的臨床病理特征以及預(yù)后關(guān)系。
　　結(jié)果：P-IGF-1R、IGF-1R和Sox2在胃癌組織中的表達(dá)率分別是41.9％、45.8%及22.5%。P-IGF-1R與 TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及手術(shù)方式等臨床病理特征相關(guān)（P<0.05）。Sox2與手術(shù)方式、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)（P<0.05）。此外，P-IGF-1R表達(dá)Sox2的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.301，P<0.001）。

3、單因素和多因素分析表明，在P-IGF-1R和Sox2的高表達(dá)其預(yù)后差于低表達(dá)的患者，同時(shí)兩者共同高表達(dá)的胃癌患者較兩者均低表達(dá)預(yù)后差（P<0.01）。95例患者接受輔助FOLFOX-4方案或者 XELOX方案化療發(fā)現(xiàn)共同高表達(dá)的P-IGF-1R/Sox2患者預(yù)后較差（P<0.05）。多因素分析亦發(fā)現(xiàn)TNM分期、手術(shù)方式及輔助化療影響著胃癌患者的預(yù)后。
　　結(jié)論：TNM分期、手術(shù)方式及輔助化療影響著胃癌患者的預(yù)后，P-IGF-1R和

4、Sox2在胃癌組織中高表達(dá)預(yù)示著胃癌患者生存預(yù)后差，它們可成為新的判斷預(yù)后的分子標(biāo)記物以及潛在的治療胃癌的靶點(diǎn)。
　　第二部分：
　　目的：磷酸化胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體（P-IGF-1R）在腫瘤惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。同樣，它在維護(hù)腫瘤干細(xì)胞干性特征及細(xì)胞生存中也起著至關(guān)重要的作用。本研究的目的是探討P-IGF-1R和干細(xì)胞因子Sox2蛋白表達(dá)相關(guān)性及其在胃癌（GC）中表達(dá)的臨床意義。
　　方法：利用免疫組織化

5、學(xué)方法檢測(cè)P-IGF-1R和Sox2在227例行可切除胃癌的組織標(biāo)本中蛋白表達(dá)，并分析兩者表達(dá)的相關(guān)性。此外，結(jié)合患者的臨床資料，分析P-IGF-1R和Sox2表達(dá)與患者的臨床病理特征以及預(yù)后關(guān)系。
　　結(jié)果：P-IGF-1R、IGF-1R和Sox2在胃癌組織中的表達(dá)率分別是41.9%、45.8%及22.5%。P-IGF-1R與 TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及手術(shù)方式等臨床病理特征相關(guān)（P<0.05）。Sox2與手術(shù)方式、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)

6、處轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)（P<0.05）。此外，P-IGF-1R表達(dá)Sox2的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.301，P<0.001）。單因素和多因素分析表明，在P-IGF-1R和Sox2的高表達(dá)其預(yù)后差于低表達(dá)的患者，同時(shí)兩者共同高表達(dá)的胃癌患者較兩者均低表達(dá)預(yù)后差（P<0.01）。95例患者接受輔助FOLFOX-4方案或者 XELOX方案化療發(fā)現(xiàn)共同高表達(dá)的P-IGF-1R/Sox2患者預(yù)后較差（P<0.05）。多因素分析亦發(fā)現(xiàn)TNM分期、手術(shù)

7、方式及輔助化療影響著胃癌患者的預(yù)后。
　　結(jié)論：TNM分期、手術(shù)方式及輔助化療影響著胃癌患者的預(yù)后，P-IGF-1R和Sox2在胃癌組織中高表達(dá)預(yù)示著胃癌患者生存預(yù)后差，它們可成為新的判斷預(yù)后的分子標(biāo)記物以及潛在的治療胃癌的靶點(diǎn)。
　　第三部分：
　　目的：進(jìn)展期胃癌及胃食管結(jié)合部癌患者能否從術(shù)前新輔助化療(NAC)中獲益仍是有爭(zhēng)議的。本文對(duì)已發(fā)表的研究進(jìn)行Meta分析，以評(píng)價(jià)以氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的新輔助化療在胃食管結(jié)合部

8、癌及胃癌治療中的作用。
　　方法：以Medline和手工搜索方式獲取全部已發(fā)表的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)(RCTs)，這些試驗(yàn)均為研究以氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的新輔助化療方案的療效。主要評(píng)價(jià)指標(biāo)為胃食管結(jié)合部癌患者生存率提高的比值比OR值，次要評(píng)價(jià)指標(biāo)為胃食管結(jié)合部癌及胃癌患者腫瘤降期率及增加R0切除率的OR值，并進(jìn)行安全性分析。以比值比（OR）來評(píng)價(jià)療效，OR值是以試驗(yàn)組（新輔助化療+手術(shù)治療組）與對(duì)照組（單純手術(shù)組）的比值比及其95%可信區(qū)間計(jì)算

9、，以RevMan5.1進(jìn)行全部運(yùn)算及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：共有7個(gè)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)納入本研究。Meta分析顯示兩組總體生存率分別為44.7%和36.7%，OR值為1.40(1.11–1.76，95%CI)，P=0.005，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3年無病生存率的為OR=1.62，（1.21-2.15，95%CI），P=0.001；腫瘤降期率(55.76%vs41.38%)，增加R0切除率(75.11%vs68.56%)，OR值分別為1.

10、77(1.27–2.49,95% CI)，P=0.0009和1.38(1.03–1.85,95% CI)，P=0.03均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些試驗(yàn)中均沒有明顯增加死亡率(5.08%vs4.86%)和并發(fā)癥(13.25%vs9.66%)等安全性問題(P>0.05)。此外，分層分析發(fā)現(xiàn)新輔助化療在歐洲國(guó)家人群、聯(lián)合化療以及靜脈給藥方式可以獲得良好的預(yù)后。
　　結(jié)論：以氟尿嘧啶的基礎(chǔ)的新輔助化療方案可以提高胃癌及胃食管結(jié)合部癌患者的總生存

11、率，并具良好安全性。另外，新輔助化療還能使腫瘤降期并提高R0切除。
　　第四部分：
　　目的：IGFR作為酪氨酸激酶受體家族成員在很多惡性腫瘤中存在異常調(diào)控和高表達(dá)等現(xiàn)象，包括胃癌在內(nèi)（GC）。IGF-1R是IGFR家族的一員，已被證明腫瘤發(fā)生、增殖、耐藥性以及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。最近，有研究報(bào)到在這些腫瘤細(xì)胞中存在少部分的亞群細(xì)胞稱之為腫瘤干細(xì)胞（CSCs），而IGF-1R被認(rèn)為是在維持胃癌干細(xì)胞干性特征中發(fā)揮了重要作用

12、。在本研究將探索磷酸化 IGF-1R受體（P-IGF-1R）對(duì)于調(diào)控胃癌干樣細(xì)胞干性功能中的作用。此外，我們還將探索P-IGF-1R能否通過刺激轉(zhuǎn)錄因子 Sox2激活從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞自我更新能力以及潛在的機(jī)制。同時(shí)，我們將探討特異性的IGF-1R抑制劑NVP-AEW541對(duì)胃癌細(xì)胞中自我更新能力、遷移能力及其對(duì)Sox2表達(dá)和轉(zhuǎn)錄功能的影響。
　　方法：采用腫瘤懸浮球成球試驗(yàn)檢測(cè)胃癌干樣細(xì)胞自我更新能力的功能學(xué)研究。用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)

13、檢測(cè)P-IGF-1R和Sox2的表達(dá)在胃癌細(xì)胞系中表達(dá)。Transwell實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)胃癌干細(xì)胞的遷移能力。Western印跡法了解 Sox2蛋白的穩(wěn)定性是否通過抑制通過泛素-蛋白酶體降解途徑。免疫印跡和免疫熒光實(shí)驗(yàn)用來確定 Sox2蛋白的定位及表達(dá)量。實(shí)時(shí)定量RT-PCR被用來評(píng)估在mRNA水平Sox2基因有無發(fā)生改變。
　　結(jié)果：在胃癌細(xì)胞株中（MKN-45和HGC-27）加入IGF-1配體使IGF-1R發(fā)生磷酸化改變導(dǎo)致在S

14、ox2在基因和蛋白水平發(fā)生改變。同時(shí)，磷酸化作用也導(dǎo)致增加的胃癌干樣細(xì)胞自我更新的能力，這是被認(rèn)為具有腫瘤干細(xì)胞特征的能力。相反，使用特異性的IGF-1R抑制劑NVP-AEW541后，可以導(dǎo)致Sox2在基因和蛋白水平表達(dá)下降，在功能上表現(xiàn)為成球能力下降。此外，我們發(fā)現(xiàn)胃癌干樣細(xì)胞在接受NVP-AEW541藥物干預(yù)后，其體外遷移能力降低。更值得注意的是，我們發(fā)現(xiàn)，由于抑制IGF-1R受體活性后不是通過蛋白酶體途徑的蛋白質(zhì)降解的Sox2蛋白