尿酸下調(diào)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞過程中11β-HSD1的表達(dá).pdf

1、目的:探討在體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBMSCs)向成骨細(xì)胞分化過程中，尿酸對hBMSCs的成骨能力以及尿酸對11β-羥化類固醇脫氫酶1(11β-HSD1)表達(dá)及其功能的影響。方法:全骨髓體外分離培養(yǎng)健康成年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，利用細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞表面標(biāo)志物對其進(jìn)行鑒定，培養(yǎng)hBMSCs至第三代后分別以完全培養(yǎng)基（含體積分?jǐn)?shù)10％的FBS、1％的雙抗、89％的低糖DMEM）為空白對照組、以成骨培養(yǎng)基（含10-8mol/L地塞米松、5

2、0mg/L維生素C、10-2mol/Lβ-甘油磷酸鈉的完全培養(yǎng)基），和尿酸干預(yù)成骨培養(yǎng)基（分別含0.2、0.4、0.8 mmol/L尿酸的成骨培養(yǎng)基）為條件對照組對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和誘導(dǎo)。培養(yǎng)誘導(dǎo)14天后，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，堿性磷酸酶染色和茜素紅染色進(jìn)行成骨細(xì)胞鑒定，11β-HSD1免疫細(xì)胞化學(xué)染色、RT-PCR技術(shù)檢測各組中11β-HSD1 mRNA表達(dá)。結(jié)果:(1)分離培養(yǎng)的細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44表達(dá)陽性，CD34表達(dá)陰性，實(shí)驗(yàn)獲

3、得了高純度hBMSCs。(2)成骨培養(yǎng)基和各尿酸干預(yù)成骨培養(yǎng)基誘導(dǎo)的細(xì)胞其堿性磷酸酶染色和茜素紅染色均為陽性且隨著尿酸濃度增高鈣結(jié)節(jié)數(shù)量逐漸增多(P＜0.05)(3)免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù):各組細(xì)胞的細(xì)胞漿里都有棕黃色陽性染色顆粒，病理圖象分析軟件測定11β-HSD1含量（以光密度值表示），隨尿酸濃度增高、成骨能力增加光密度值逐漸減少(P＜0.05)(4) RT-PCR技術(shù)結(jié)果:各組都有11β-HSD1 mRNA表達(dá)，隨尿酸濃度增高、成骨