真菌激發(fā)子促進蛹蟲草類胡蘿卜素生物合成的研究.pdf

1、蛹蟲草具有免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖、鎮(zhèn)靜、催眠和調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)等功效。新近研究表明蛹蟲草含有稀少的水溶性類胡蘿卜素，具有獨特的生理價值。因此，對其所含類胡蘿卜素的研究日益增多，但絕大部分仍處于提取、鑒定等階段，而對如何提高類胡蘿卜素的含量鮮有報道。本文通過優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)條件，添加天然激發(fā)子誘導(dǎo)等途徑提高蛹蟲草的類胡蘿卜素含量，同時對激發(fā)子促進蛹蟲草類胡蘿卜素合成的機制進行研究。主要結(jié)果如下：
　?。?）以蛹蟲草類

2、胡蘿卜素含量為指標(biāo)，采用單因素與正交試驗相結(jié)合的方法優(yōu)化了蛹蟲草固體發(fā)酵的實驗條件，得到的最佳培養(yǎng)條件為大米培養(yǎng)基30 g，營養(yǎng)液蛋白胨濃度為1.5％，暗培養(yǎng)天數(shù)為6d，光照時間為8d。經(jīng)驗證，在此培養(yǎng)條件下，蛹蟲草固體發(fā)酵后的類胡蘿卜素含量可達309.54μg/g。
　?。?）以粘紅酵母Rhodotorula glutinis、釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae、紅曲霉Monascus rubber、三孢布

3、拉霉Blakeslea trispora、金針菇Flammulina velutipes5種真菌作為激發(fā)子，考察對蛹蟲草產(chǎn)類胡蘿卜素的影響，結(jié)果表明粘紅酵母在一個濃度下對蛹蟲草類胡蘿卜素含量有明顯促進作用，提高了13.72%。其余真菌激發(fā)子對蛹蟲草均無明顯正向激發(fā)作用。
　　（3）以粘紅酵母激發(fā)子為研究對象，考察粘紅酵母培養(yǎng)時間、激發(fā)子的添加量和添加時間對蛹蟲草類胡蘿卜素含量的影響。結(jié)果表明，不同培養(yǎng)時間和激發(fā)子添加時間對類胡蘿卜

4、素的激發(fā)作用顯著，而縮小濃度范圍后，激發(fā)子濃度影響效果并不明顯。最后結(jié)果顯示84 h為粘紅酵母最優(yōu)發(fā)酵時間，比對照提高了38.19%，激發(fā)子最佳濃度為1.5 g/L，比對照提高了26.86%，最佳的添加時間5 d，比對照提高了47.44%。將粘紅酵母激發(fā)子分離為三種組分，考察各組分的添加對對蛹蟲草類胡蘿卜素含量的影響，結(jié)果表明對類胡蘿卜素有激發(fā)作用的有效組分應(yīng)為去除了蛋白質(zhì)和多糖的小分子物質(zhì)Part O。
　?。?）通過構(gòu)建蛹蟲草

5、基因組的本地blast數(shù)據(jù)庫比對得到蛹蟲草中圓酵母素加氧酶基因carT和醛脫氫酶carD基因的DNA序列，成功克隆測序并進行了序列的生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明 carT基因蛋白質(zhì)在蛹蟲草和白僵菌中相當(dāng)保守，并且該蛋白質(zhì)在多種真菌中的表達都是高度同源的，表明其進化的頻率并不高。而 carD基因在同源進化的過程中也是相當(dāng)保守的，與白僵菌的氨基酸序列達到了百分百的同源，雖然在基因序列上有所差異，但尚不明確該差異在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上造成的影響。