甘薯類胡蘿卜素合成相關(guān)基因片段的克隆.pdf

1、類胡蘿卜素是自然界分布最廣、種類最豐富的色素，在植物、動物、藻類及藍細(xì)菌中都有重要的生物功能。為研究甘薯薯肉色突變體農(nóng)大輻14的類胡蘿卜素合成發(fā)生突變的分子機理，本研究分析了突變體塊根膨大過程中類胡蘿卜素含量的變化，并進行類胡蘿卜素合成相關(guān)基因片斷的克隆。主要結(jié)果如下:　　1、比色法測定結(jié)果表明，突變體中類胡蘿卜素含量比對照提高5～10倍。隨著塊根的膨大，突變體中類胡蘿卜含量明顯增加，而對照類胡蘿卜素含量沒有明顯的變化?！　?、根據(jù)

2、雙子葉植物類胡蘿卜素合成結(jié)構(gòu)基因氨基酸序列的保守區(qū)域設(shè)計簡并引物，擴增出甘薯類胡蘿卜素合成結(jié)構(gòu)基因(GGPS、PSY，PDS、ZDS、LYC-b)的cDNA片斷，所獲序列同其他植物類胡蘿卜素合成結(jié)構(gòu)基因序列同源性非常高?！　?、通過RACE技術(shù)克隆了PDS基因的全長cDNA，序列長為2,128bp，具有完整的開放閱讀框架，編碼572個氨基酸，與其他植物PDS基因高度同源。RT-PCR檢測表明，在突變體和對照塊根膨大過程中，PDS基因是

3、組成性表達的。實時熒光定量PCR分析結(jié)果表明，隨著塊根的膨大，突變體和對照PDS基因的表達逐漸下降。在塊根每個發(fā)育階段，突變體PDS基因的表達量均比對照大?！　?、cDNA-AFLP分析結(jié)果表明，突變體和對照塊根中的大部分基因表達是一致的。尋找到32條突變體和對照表達有明顯差異的基因片斷，測定其中6個片斷的基因序列。Blast結(jié)果表明，F(xiàn)ragment2部分序列同梨的推測與衰老有關(guān)的基因(AY436773.1)一致性達100％；Fra