不同HER-2水平的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞內(nèi)miRNAs表達(dá)譜及相關(guān)miRNAs對(duì)癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、背景：表皮生長(zhǎng)因子受體包含有多個(gè)不同類(lèi)型的受體，含有膜酪氨酸激酶活性的人表皮生長(zhǎng)因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）屬于其中。當(dāng)HER-2基因被激活，可導(dǎo)致細(xì)胞增生活躍和阻礙細(xì)胞的凋亡，這為腫瘤在乳腺癌中的發(fā)展提供主要的驅(qū)動(dòng)力。一類(lèi)內(nèi)源性的、保守的、非編碼的、蛋白單鏈小RNA（約含有22個(gè)核苷酸），稱(chēng)微小RNAs（MicroRNAs，miRNAs）。miRNAs主要

2、通過(guò)腫瘤生物學(xué)如細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞凋亡和轉(zhuǎn)移等方面調(diào)節(jié)細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展。目前，miRNAs既可作為癌基因又可作為抑癌基因參與細(xì)胞的調(diào)控。近些年有關(guān)HER-2和miRNAs之間的報(bào)道日益增多，其中有些研究提示乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與HER-2的過(guò)表達(dá)和miRNAs的失調(diào)相關(guān)聯(lián)。因此關(guān)于探究miRNAs和HER-2之間的聯(lián)系極為重要。
　　目的：通過(guò)對(duì)比觀察人乳腺癌 MCF-7細(xì)胞和MCF-7穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HER-2（MCF-7/HER-2）細(xì)胞

3、中miRNAs的表達(dá)差異，初步篩選出與HER-2表達(dá)相關(guān)的miRNAs表達(dá)譜，為miRNAs通過(guò)參與HER-2信號(hào)通路從而參與調(diào)控乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制提供研究基礎(chǔ)。
　　方法：
　?。?）本研究采用miRNAs芯片技術(shù)，培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞和MCF-7/HER-2細(xì)胞，檢測(cè)兩株細(xì)胞內(nèi)miRNAs的表達(dá)，以MCF-7細(xì)胞為基準(zhǔn)，篩選出與HER-2表達(dá)相關(guān)且差異大于兩倍的miRNAs。
　?。?）選取MCF-7

4、/HER-2細(xì)胞較MCF-7細(xì)胞上調(diào)的hsa-miR-181a-5p和下調(diào)的hsa-miR-877-3p為對(duì)象，采取實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time reverse transcriptionpolymerase chain reaction，qRT-PCR）驗(yàn)證其在MCF-7細(xì)胞和MCF-7/HER-2細(xì)胞中的表達(dá)量。
　?。?）選取MCF-7/HER-2細(xì)胞，分別轉(zhuǎn)染hsa-miR-18

5、1a-5p阻遏物（miR-181a-5p ASO）和hsa-miR-877-3p模擬物（miR-877-3p mimic），通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，MTT實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞功能學(xué)的改變。
　?。?）運(yùn)用生物信息學(xué)方法對(duì)這兩個(gè)miRNAs可能的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)。
　　結(jié)果：
　　（1）利用miRNAs微陣列，篩選獲得217個(gè)與HER-2相關(guān)的miRNAs，其中MCF-7/HER-2細(xì)胞較MCF-7細(xì)胞上

6、調(diào)的miRNAs有123個(gè)，下調(diào)的miRNAs有94個(gè)。
　　（2）qRT-PCR結(jié)果顯示，MCF-7/HER-2細(xì)胞與MCF-7細(xì)胞相比，hsa-miR-181a-5p的表達(dá)顯著上調(diào)，hsa-miR-877-3p的表達(dá)顯著下調(diào)（P<0.01）。
　?。?）hsa-miR-181a-5p對(duì)HER-2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移的活性有促進(jìn)作用，hsa-miR-877-3p對(duì)HER-2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移的活性

7、有抑制作用。
　　結(jié)論：
　?。?）MCF-7細(xì)胞和MCF-7/HER-2細(xì)胞 miRNAs的表達(dá)有差異。
　?。?）hsa-miR-181a-5p的表達(dá)在MCF-7/HER-2細(xì)胞中較MCF-7細(xì)胞表達(dá)顯著上調(diào)。在HER-2陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞中hsa-miR-181a-5p可促進(jìn)細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。
　　（3）hsa-miR-877-3p的表達(dá)在人乳腺癌細(xì)胞MCF-7/HER-2中較MCF-7表達(dá)顯著下調(diào)。在