FGFR2在成年小鼠內耳中的表達及與聽功能相關性的研究.pdf

1、細胞因子是調節(jié)細胞的生長和發(fā)育的因素之一，其與細胞膜上的特異性受體結合后，觸發(fā)細胞內一系列生化反應，導致DNA合成。成纖維細胞生長因子(fibroblastgrowthfactors，F(xiàn)GFs)屬于肝素結合生長因子家族(heparinbindinggrowthfactor,HBGF)，是一種多功能非特異性活性物質，能調節(jié)細胞增殖、分化和功能的多肽家族，對內皮細胞、成纖維細胞、上皮細胞和平滑肌細胞等多種中胚層和神經(jīng)外胚層來源的細胞有促進D

2、NA合成和促進細胞分裂作用，還可延緩細胞的衰老。成纖維細胞生長因子受體(fibroblastgrowthfactorreceptors，F(xiàn)GFRs)屬于免疫球蛋白樣受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase，PKT)家族，目前己對這個重要的基因家族在多種生物學過程中的作用獲得了有價值認識。這些作用包括中胚層的誘導和形成；細胞的生長、移行和分化；器官的形成和維護；神經(jīng)的分化和存活；惡變；傷口的愈合。內耳是調節(jié)聽力和平衡的

3、器官，來源于外胚層鄰近后腦的生長板。生長板的誘導、隨后的形態(tài)形成以及內耳上皮細胞和感覺神經(jīng)元的分化都涉及到耳內部間和耳與非耳部之間的信號的相互作用。已有研究表明，在脊椎動物中，成纖維細胞生長因子家族的成員控制機體輪廓和器官的形成，成纖維細胞生長因子及其受體在內耳發(fā)育、結構功能維持、損傷修復過程中起重要作用。FGFR2在胚胎期的內耳中有表達，其對內耳的正常形成很關鍵，尚未見其在出生后小鼠內耳中的表達和在聽功能方面作用的報道。 為探

4、討FGFR2基因在成年小鼠內耳中的表達情況和其在聽功能方面的作用，本實驗按如下三部分完成。第一部分以同窩出生的1月大小的FGFR2功能降低(基因型為FGFR2-Neo-250MT/WT，MT)為模型小鼠和功能正常小鼠(野生型；簡稱WT)為實驗對象，觀察兩種動物的聽功能并比較腹腔注射慶大霉素后二者之間的聽功能變化。第二部分采用免疫組化法，用FGFR2基因的cDNA質粒體外轉錄合成RNA探針，以原位雜交的方法觀察內耳組織中FGFR2基因mR

5、NA的表達分布。第三部分觀察內耳組織學切片：常規(guī)HE染色，光鏡下觀察上述兩種動物模型在內耳組織形態(tài)學上有無變化；腹腔注射Brdu，觀察內耳組織中細胞的增生情況。 同窩出生的成年MT模型小鼠和WT小鼠在聽功能方面無明顯差異；注射GM后2周，MT小鼠的ABR反應閾較低、波幅較高，聽功能損失似較WT小鼠輕。 FGFR2mRNA在WT成年小鼠耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)中表達；耳蝸的其它組織中表達陰性。注射GM后，F(xiàn)GFR2基因mRNA的表

6、達在FGFR2功能降低和功能正常兩組動物中無明顯差異，與注射GM前相比，F(xiàn)GFR2的表達均增強。 MT組及WT組小鼠的耳蝸結構無明顯異常。通過Brdu檢測，在MT成年小鼠的內耳組織中，耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)細胞和螺旋韌帶的成纖維細胞增生明顯。 部分降低FGFR2表達的成年小鼠耳蝸在大體上無畸形，在光鏡下觀察，內耳組織形態(tài)學無異常。 正常成年小鼠FGFR2主要在耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)中表達。 無干擾情況下，F(xiàn)GFR2部