基于不同標(biāo)記物的免疫層析方法檢測豬霍亂沙門氏菌的研究.pdf

1、豬霍亂沙門氏菌是一種重要的食源性致病菌，輕者能夠引發(fā)胃腸炎、傷寒和腹瀉，重者導(dǎo)致敗血癥，甚至死亡。豬霍亂沙門氏菌的暴發(fā)流行具有全球性，人類通過食用被豬霍亂沙門氏菌感染的食物而引起中毒。因此，研究建立高效、快速的方法檢測出食物中的豬霍亂沙門氏菌能有效切斷該菌的傳播途徑，防止中毒事件的發(fā)生。本文研究了不同納米材料（熒光微球、磁珠、金磁微粒）在雙抗夾心免疫層析快速檢測方法中的應(yīng)用。
　　第二章中制備了熒光微球免疫層析試紙條。在制備免疫熒

2、光微球的過程中，根據(jù)抗體偶聯(lián)率和檢測線信號強度優(yōu)化了抗體投入量以及偶聯(lián)體系的pH。此外，根據(jù)檢測線信號強度優(yōu)化試紙條檢測線的檢測抗體濃度。結(jié)果顯示：最優(yōu)抗體投入量為300μg/mg、偶聯(lián)體系最優(yōu)pH為6，檢測線最優(yōu)抗體濃度為2.0 mg/mL。該方法對純培養(yǎng)的豬霍亂沙門氏菌檢測靈敏度為1.9×106 CFU/mL；特異性較好，對金黃色葡萄球菌有弱交叉反應(yīng)。
　　第三章中將免疫磁分離技術(shù)和熒光微球免疫層析方法結(jié)合。根據(jù)捕獲效率優(yōu)化免

3、疫磁珠制備中抗體的投入量和捕獲過程中免疫磁珠的使用量，并研究了免疫磁珠對不同濃度豬霍亂沙門氏菌捕獲效果的影響。此外，根據(jù)熒光微球試紙條的檢測結(jié)果探究了熱處理過程中時間和溫度的影響。結(jié)果顯示：最優(yōu)抗體的投入量為30μg/mg，最優(yōu)免疫磁珠的用量為100μg/mL，該免疫磁珠對不同濃度豬霍亂沙門氏菌的捕獲效率在90％以上，最優(yōu)熱處理條件為75℃10 min。通過免疫磁珠對豬霍亂沙門氏菌進行富集后，熒光微球免疫層析試紙條方法能檢測出濃度為1.

4、52×105 CFU/mL的目標(biāo)菌，比直接使用熒光微球試紙條方法的靈敏度提高了10倍。
　　第四章中建立了基于金磁微粒的免疫層析方法。本章節(jié)對金磁微粒進行了表征。根據(jù)捕獲效率優(yōu)化了免疫金磁微粒制備過程中偶聯(lián)體系pH、抗體投入量，確定了捕獲過程中免疫金磁微粒用量，并評價了免疫金磁微粒的特異性和對不同濃度豬霍亂沙門氏菌的捕獲效率。在金磁微粒和抗體的偶聯(lián)過程中，偶聯(lián)體系最優(yōu)pH為6，最優(yōu)抗體加入量為150μg/mg。20μg/mL免疫金