2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、基因調(diào)控延遲減毒和提高異源抗原表達(dá)的豬霍亂沙門氏菌載體的構(gòu)建ConstructionofregulateddelayedaRenumedSalmonellacholeraesuisevectorwithenhancedheterologousantigenprotein國家自然科學(xué)基金(31172300)江蘇省高校自然科學(xué)重大項(xiàng)目(12KJA230002)高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(博導(dǎo)類)(20133250110002)江蘇高校優(yōu)

2、勢學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PAPD)江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心研究生:吉貞穎專業(yè):基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師:石火英教授揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2014年5月2碩士學(xué)位論文因在沒有阿拉伯糖的動物機(jī)體內(nèi)可以高效表達(dá);引入的AasdA突變使減毒株(asdA一)與蛋白表達(dá)載體pAY3493(asdA)形成平衡致死系統(tǒng),使得只有攜帶外源抗原質(zhì)粒的疫苗候選株才能穩(wěn)定地在動物機(jī)體內(nèi)復(fù)制。依據(jù)無抗性標(biāo)記缺失基因的自殺載體方法,首先分別構(gòu)建含缺失基因AP

3、crD::T1’araCPBADcrp,AmanA,ArelA::araCPBADlacITT和△以s臼H結(jié)構(gòu)的自殺載體;即在GenBank中搜索豬霍亂沙門氏菌的全基因序列,找到在豬霍亂沙門氏菌上擬缺失基因或啟動子的上下游序列,在上下游基因中設(shè)計(jì)引物,以上下游基因的300bp左右為同源臂,刪除擬缺失基因或啟動子序列,以豬霍亂沙門氏菌C783為模板,經(jīng)PCR等分子生物學(xué)技術(shù),獲得刪除基因或啟動子序列后與C78—3有500~600堿基的同源

4、臂序列,將此同源臂序列連接至自殺載體質(zhì)粒pREll2(pREll8)上,通過酶切鑒定和序列測定,將正確缺失基因或啟動子序列的pREll2載體轉(zhuǎn)化至工程菌大腸桿菌z7213中,獲得自殺載體妒213(pYAs001)(APcrp::TTaraCPBADcp),Z7213(pYAs002)(AmanA),x7213(pYAs003)(ArelA::araCPBAD/ac/TT)和;c7213(pYAs004)(AasdA)。然后以豬霍亂沙門氏

5、菌強(qiáng)毒株C783為受體菌,含自殺性質(zhì)粒的Z7213為供體菌,運(yùn)用自殺載體介導(dǎo)的同源重組技術(shù),在C78—3上分別引入AP。∞::TTaraCPBADcrp,AmanA,ArelA::araCPBAD/ac/TT和AasdA,最后獲得爐011(AP。rp::TTaraCPBADcrp,AmanA,ArelA::araCPBAD/ac/TT和AasdA)減毒株。2減毒豬霍亂沙門氏菌載體妒o11生物學(xué)特性的研究本論文的目的是用基因調(diào)控的方法,使

6、減毒載體在入侵宿主機(jī)體時(shí)能夠具有野生型豬霍亂沙門氏菌那樣的侵襲能力,侵入宿主后使毒力基因失表達(dá)而減毒,以保障疫苗候選株的安全性。為驗(yàn)證本研究中妒011減毒株是否達(dá)到論文設(shè)計(jì)的目的,首先將豬鏈球菌II型的6磷酸葡萄糖脫氫酶基因(6PGD)克隆插入原核表達(dá)載體pAY3493中,形成表達(dá)6PGD蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒pYA6PGD,再將pYA6PGD轉(zhuǎn)化至減毒株灼011中,成為致死/平衡系統(tǒng)的x0011(pYA6PGD)(見第三章)。經(jīng)過測定妒0

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