人食管癌組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因表達(dá)和其反義RNA體內(nèi)外抑瘤作用的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文人食管癌組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因表達(dá)和其反義RNA體內(nèi)外抑瘤作用的研究姓名：潘立峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：白世祥;單保恩20040401中文摘要V E G F m R N A 的表達(dá)，探討了以V E G F 為靶點(diǎn)治療食管癌的可行性。結(jié)果：1 ．V E G F 蛋白在食管癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率為7 0 ．9 ％，V E G F 蛋白的農(nóng)達(dá)水、I t 與食管癌組織的病理學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；

2、而與腫瘤人小、T N M 分期、性別、年齡無(wú)關(guān)。提示V E G F 在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要的作用。2 ．食管癌組織中微血管分布不均，血管密集區(qū)豐要集中在癌灶邊緣；M V D 與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)：M V D與V E G F 的表達(dá)之問(wèn)存在正相關(guān)性( r = 0 ．4 5 6 ，P < O ．0 t ) 。提示v E G F 具有促進(jìn)忡癡向管形成的作用。3 ．食管癌細(xì)胞株T E ．1 、T E ．1 0 和食管癌組織

3、中的V E G F m R N A 表達(dá)以V E G F l 8 9 、V E G F l 6 5 、V E G F l 2 I 三種亞型為主；腫蝻紕釤{ V E G F m R N A 的表達(dá)量比癌旁組織增高( P < O 。0 1 ) ；V E G F l 2 1 和V E G F l 6 5 兩個(gè)低分子量亞型表達(dá)量較高。結(jié)論：V E G F 基兇在食管癌組織中呈過(guò)度表達(dá)現(xiàn)象可能與食管癌的發(fā)叫! 、發(fā)展有關(guān)；并且與腫瘤惡性程度

4、、轉(zhuǎn)移、微血管形成能力相關(guān)。此研究結(jié)果對(duì)深入探討食管癌與V E G F 基因的關(guān)系提供了有意義的理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第二部分V E G F 反義R N A 對(duì)食管癌細(xì)胞T E 一1 的體外抑制作用的研究目的：研究T E ．1 細(xì)胞經(jīng)V E G F 反義R N A 處理后對(duì)細(xì)胞增殖周期及細(xì)胞捌廣的影響。方法： 1 ．質(zhì)粒的擴(kuò)增、提取及鑒定：采用D H 5 。大腸桿菌為工作菌，制備感受態(tài)細(xì)菌，擴(kuò)增質(zhì)粒，提取質(zhì)粒D N A ，并經(jīng)酶切鑒定以各

5、轉(zhuǎn)染使用。2 ．細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、細(xì)胞體外增殖及V E G F 封閉作用檢測(cè)：利用高表達(dá)V E G F m R N A 及蛋白的食管癌細(xì)胞系( T E ．1 細(xì)胞) 為體外細(xì)胞系模型，將含有反義V E G F c D N A 、p c D N A 3 ．1 空載體質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體導(dǎo)入T E ．I 細(xì)胞；川M T T 法檢測(cè)三組細(xì)胞( 轉(zhuǎn)染反義R N A 組、空載體組和對(duì)照組) 增殖情況：采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)三組細(xì)胞V E G F 基因的蛋白表

6、達(dá)；細(xì)胞原傅；I } 交和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)( R T - P C R ) 技術(shù)檢測(cè)三組細(xì)胞V E G F m R N A 的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)三組細(xì)胞的凋亡率和細(xì)胞周期分們j 。結(jié)果：1 ．采用脂質(zhì)體可以成功地將V E G F c D N A 轉(zhuǎn)入食管癌T E - 1 細(xì)胞- I - ：2 ．三組細(xì)胞( 轉(zhuǎn)染反義R N A 組、空載體組和對(duì)照組) 體外增殖反戍無(wú)明漫薺異：3 ．與對(duì)照組和空載體組細(xì)胞相比，反義組的T E ．1 細(xì)胞表