SLC26A4基因的突變檢測與一個新的耳聾基因克隆的研究.pdf

1、聽力喪失是最常見的感覺障礙。遺傳性耳聾中，約70％為非綜合征型耳聾(nonsyndromic hearing loss，NSHL)。學(xué)語前NSHL中，以常染色體隱性遺傳方式遺傳者占80％(其相關(guān)位點命名為DFNB)，常染色體顯性遺傳方式遺傳者占15％(命名為DFNA)，x連鎖遺傳的占2～3％(命名為DFN)。NSHL具有高度的遺傳異質(zhì)性，到目前為止，已定位了100多個NSHL相關(guān)基因位點，其中DFNA52是中國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國家重點實驗室于

2、2002年定位的一個NSHL的基因位點，最大IrOD值為6.89。其中39個耳聾疾病相關(guān)基因已被克隆。其中，GJB2的突變與50％左右的先天性耳聾相關(guān)，為最常見的耳聾相關(guān)基因；其次即為SLC26A4，占5％～10％。SLC26A4基因突變所導(dǎo)致的耳聾，可以表現(xiàn)為綜合征型，也可以表現(xiàn)為非綜合征型，且耳聾一般均為學(xué)語前性，70％～80％伴有前庭導(dǎo)水管擴張(EVA)。本研究包括兩個部分：1.SLC26A4基因的突變檢測2.一個新的耳聾基因克聾

3、的研究目的：1．通過對伴前庭導(dǎo)水管擴大的先天性耳聾患者行SLC26A4基因的21個外顯子進行突變檢測，以明確耳聾患者的基因診斷并對人工耳蝸手術(shù)提供參考。 2．通過對一個新的耳聾基因位點的候選基因進行研究，期望克隆該耳聾致病基因。 方法：1．在湘雅醫(yī)院耳聾?？崎T診收集5個擬行人工耳蝸植入呈常染色體隱性遺傳且伴有EVA表現(xiàn)的語前性耳聾家系，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)結(jié)合DN

4、A直接測序方法檢測其SLC26A4基因的21個外顯子突變情況，并在人工耳蝸植入術(shù)中觀察耳蝸外淋巴滲漏情況，必要時采用軟組織和耳腦膠封堵耳蝸造孔。2．采用候選基因克隆法對一個常染色體顯性遺傳性耳聾DFNA52位點內(nèi)的基因進行分析后，通過查找UniGene、GeneCard等基因表達(dá)相關(guān)數(shù)據(jù)庫，從人或老鼠的耳蝸中分離到的特異表達(dá)的基因作為耳聾的候選基因，一共16個(包括HDAC3、FGFBI、SPOCK、KLHL3、HNRPA0、CDC23

5、、GFRA3、EGRl、HSPA9B、CTNNAl、MATR3、PAIP2、PCDHB5、NR3C1、TCERGl、PPP2R2B、)，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)結(jié)合DNA直接測序方法對其進行突變檢測。 結(jié)果：1．在突變檢測研究中，所有患者中共發(fā)現(xiàn)4個不同類型的SLC26A4基因突變(包括IVS7-2A>G、IVSlO-12T>A、754T>C、1229C>T)，其中在家系A(chǔ)中

6、發(fā)現(xiàn)的IVSl0-12T>A為新的突變類型，在有突變3例中術(shù)中出現(xiàn)“鐙井噴”現(xiàn)象，2例無突變則無此現(xiàn)象。 2．在克隆研究中，在16個候選基因中發(fā)現(xiàn)3個堿基改變，這些堿基改變與家系患者、疾病并沒有實現(xiàn)共分離，所以這些堿基改變是3個多態(tài)，其中HSPA9B基因IVS2+79 81 del tct為新的多態(tài)。本研究尚未找到疾病的致病基因，有待進一步擴大檢測范圍。 結(jié)論：1．伴前庭導(dǎo)水管擴大的先天性耳聾約60[％](3/5)可檢測