原發(fā)性乳腺癌免疫功能低下的分子機(jī)制及逆轉(zhuǎn)作用研究.pdf

1、目的： 腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是腫瘤細(xì)胞在與機(jī)體免疫系統(tǒng)相互作用中導(dǎo)致免疫監(jiān)視功能降低的結(jié)果。盡管機(jī)體內(nèi)存在一套完整的免疫監(jiān)視機(jī)制，識(shí)別和排斥腫瘤的發(fā)生，但仍難以阻止腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，因?yàn)槟[瘤細(xì)胞有多種機(jī)制可以逃避人體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。CTLA-4是在T細(xì)胞活化中提供第二信號(hào)的一個(gè)共刺激分子，對(duì)T細(xì)胞的活化起到了負(fù)調(diào)節(jié)作用。CTLA-4可以拮抗CD28的作用，與B7結(jié)合下調(diào)T細(xì)胞反應(yīng)，從而使腫瘤細(xì)胞逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)視、免疫制裁。本研究主

2、要探討乳腺癌患者免疫功能低下與CTLA-4高表達(dá)的相關(guān)性及其可能的作用機(jī)制，并用anti-CTLA-4抗體對(duì)低下的免疫功能進(jìn)行逆轉(zhuǎn)治療。 方法： 取6例健康對(duì)照及11例未經(jīng)治療的原發(fā)性乳腺癌患者外周血的淋巴細(xì)胞與PHA共同孵育，培養(yǎng)72小時(shí)后：(1)MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖指數(shù)：(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面IL-2R(CD25)的表達(dá)：(3)ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中IL-2的表達(dá)水平：(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)30例未

3、經(jīng)治療的原發(fā)性乳腺癌患者外周血淋巴細(xì)胞表面CTLA-4的表達(dá)，并以15例健康女性作為對(duì)照；(5)取其中11例CTLA-4高表達(dá)乳腺癌患者外周血的淋巴細(xì)胞與anti-CTLA-4抗體共同孵育，對(duì)照組是淋巴細(xì)胞加1640培養(yǎng)液，試驗(yàn)組1是患者淋巴細(xì)胞加PHA和1640培養(yǎng)液，試驗(yàn)組2是患者淋巴細(xì)胞加PHA、1640培養(yǎng)液和anti-CTLA-4抗體，培養(yǎng)后用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖指數(shù)：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達(dá)：ELIS

4、A法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中IL-2的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1．在相同濃度PHA刺激下乳腺癌患者淋巴細(xì)胞的增殖指數(shù)(1.39±0.22)明顯低于健康對(duì)照組的淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)(1.91±0.34)，P<0.01。 2．PHA刺激前乳腺癌患者淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達(dá)(7.34％±1.59％)，低于健康對(duì)照組(11.20％±1.02％)，P<0.01；PHA刺激后乳腺癌患者淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達(dá)為(9.99％±1.68

5、％)，低于健康對(duì)照組(14.71％±1.82％)，P<0.01。 3．PHA刺激前乳腺癌患者培養(yǎng)上清中IL-2的表達(dá)水平(174.64ng/L±35.42ng/L)，低于健康對(duì)照組(239.67 ng/L±33.65 ng/L)，P<0.01：PHA刺激后乳腺癌患者培養(yǎng)上清中IL-2的表達(dá)水平為(233.04 ng/L±44.30 ng/L)，低于健康對(duì)照組(310.35 ng/L±43.72 ng/L)，P<0.01。

6、 4．乳腺癌患者CD3<'+>CTLA-4<'+>細(xì)胞的百分率(19.75％±4.23％)，明顯高于健康對(duì)照組(12.42％±5.60％)，P<0.01。 5．將CTLA-4高表達(dá)乳腺癌患者外周血的淋巴細(xì)胞與anti-CTLA-4抗體共同孵育后，anti-CTLA-4抗體組的淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)高于單純PHA組，P<0.01。 6．經(jīng)anti-CTLA-4抗體作用后，乳腺癌患者淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達(dá)高于對(duì)照組(P<0.

7、01)和單純PHA組(P<0.01)。 7．乳腺癌患者外周血的淋巴細(xì)胞與anti-CTLA-4抗體共同孵育后，培養(yǎng)上清中IL-2的表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.01)和PHA組(P<0.01)。 結(jié)論： 1．乳腺癌患者的淋巴細(xì)胞在相同濃度PHA刺激后，其增殖指數(shù)、淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達(dá)及培養(yǎng)上清中IL-2的表達(dá)水平均低于健康對(duì)照，說(shuō)明乳腺癌患者細(xì)胞免疫功能低下，T細(xì)胞活化與增殖率均低于健康對(duì)照。 2．

8、乳腺癌患者外周血T細(xì)胞表面CTLA-4表達(dá)增高，其高表達(dá)導(dǎo)致了乳腺癌患者B7：CD28/CTLA-4共刺激通路異常，影響了T細(xì)胞徹底清除腫瘤細(xì)胞，從而使腫瘤逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視、免疫制裁，進(jìn)一步發(fā)生轉(zhuǎn)移。 3．CTLA-4高表達(dá)的乳腺癌患者外周血淋巴細(xì)胞與anti-CTLA-4抗體共同孵育，結(jié)果表明anti-CTLA-4抗體組的淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)、淋巴細(xì)胞表面IL-2R的表達(dá)及培養(yǎng)上清中IL-2的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組和單純PHA