以葉酸-BSA為載體的靶向性釓造影劑的制備及其體外弛豫和細(xì)胞攝取研究.pdf

1、隨著腫瘤病例的極速增加，腫瘤的早期診斷就變得尤為重要。磁共振成像技術(shù)就是一種臨床上常用的腫瘤診斷技術(shù)。目前，臨床上應(yīng)用的大部分磁共振造影劑（包括常用的釓類造影劑）對(duì)腫瘤組織并無特異性的靶向作用，因而降低了造影效果。因此，磁共振成像技術(shù)應(yīng)用于腫瘤診斷的關(guān)鍵在于研發(fā)靶向性的磁共振造影劑以提高腫瘤定位能力，并增強(qiáng)檢測(cè)的靈敏性和準(zhǔn)確性。葉酸-葉酸受體靶向就是近來備受關(guān)注的新型抗腫瘤機(jī)制，它是利用葉酸受體在某些腫瘤部位過度表達(dá)、而在正常組織中低水

2、平表達(dá)的特征而實(shí)現(xiàn)葉酸偶聯(lián)藥物的靶向輸送?；谌~酸受體的表達(dá)特征和葉酸配體的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，葉酸受體已成為腫瘤診斷和治療的理想靶點(diǎn)。
　　 本文結(jié)合葉酸介導(dǎo)靶向輸送的理念和磁共振造影成像的安全性與靈敏性，設(shè)計(jì)合成了葉酸介導(dǎo)的靶向性釓造影劑—葉酸-BSA-(Gd-DTPA)n。首先運(yùn)用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了牛血清白蛋白（BSA）與二乙三胺五乙酸環(huán)酸酐（cDTPAA）的偶聯(lián)條件。接著在最佳條件的反應(yīng)介質(zhì)中，葉酸活化酯與BSA 反應(yīng)生成葉酸-白

3、蛋白偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物再與DTPA的酸酐反應(yīng)，最后與氯化釓進(jìn)行螯合并經(jīng)SephadexG-25 分離純化制得葉酸-BSA-(Gd-DTPA)n。通過紫外光譜法對(duì)造影劑的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定，并定量測(cè)定了造影劑中葉酸、Gd-DTPA對(duì)BSA的偶聯(lián)率。通過測(cè)定造影劑的體外弛豫時(shí)間T1，進(jìn)一步分析其弛豫性能R1。
　　 用異硫氰酸熒光素（FITC）對(duì)造影劑進(jìn)行熒光標(biāo)記，以葉酸受體陽性的KB、HeLa細(xì)胞和葉酸受體陰性的A549細(xì)胞為模型細(xì)胞，

4、通過倒置熒光顯微鏡定性觀察，研究了細(xì)胞對(duì)造影劑的特異性攝取作用；同時(shí)也通過釓含量的測(cè)定來分析細(xì)胞的攝取情況。
　　 結(jié)果表明，葉酸-BSA-(Gd-DTPA)n 造影劑中，葉酸對(duì)BSA的偶聯(lián)比約為5，Gd-DTPA的偶聯(lián)比隨著酸酐投量的增加而增大；體外弛豫性能R1 約為6×10-3L·mmoL-1 ms-1，與未偶聯(lián)葉酸的BSA-(Gd-DTPA)n的弛豫性能無顯著性差異，但比小分子Gd-DTPA的弛豫性能提高了2 倍左右。在細(xì)

5、胞攝取實(shí)驗(yàn)中，熒光標(biāo)記的葉酸-BSA-(Gd-DTPA)n 在葉酸受體陽性細(xì)胞KB和HeLa的胞漿內(nèi)有明亮的熒光，熒光強(qiáng)度隨著加入的游離葉酸濃度的增大而減弱，而在葉酸受體陰性的A549細(xì)胞中熒光很弱；未偶聯(lián)葉酸的BSA-(Gd-DTPA)n 在三種細(xì)胞中熒光都很弱。在細(xì)胞攝取的影響因素實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長、給藥濃度的增大，KB細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，但有飽和性；當(dāng)?shù)鞍咨吓悸?lián)的Gd-DTPA數(shù)目過大時(shí)，會(huì)因結(jié)合位阻增大而熒光減弱。