冷凍聯(lián)合免疫治療腫瘤對(duì)免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 通過(guò)觀察荷瘤小鼠二次接種腫瘤細(xì)胞后的生存期、腫瘤生長(zhǎng)情況、血清細(xì)胞因子Tumor necrosis factor-α(TNF-α)和Interferon-γ(IFN-γ)的含量，來(lái)分析冷凍及免疫治療的抗腫瘤療效，為臨床雙原發(fā)、多原發(fā)腫瘤、轉(zhuǎn)移瘤患者冷凍聯(lián)合免疫治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及理論依據(jù)。 方法 選用18～22g昆明小鼠160只接種S180肉瘤細(xì)胞后，隨機(jī)分為四組，對(duì)腫瘤分別進(jìn)行冷凍治療(A組)、免疫治療

2、(B組)、冷凍+免疫治療(C組)及生理鹽水對(duì)照(D組)，治療結(jié)束后第10天，將每組小鼠再隨機(jī)分成兩組，每組20只，共8組，分別二次接種小鼠S180肉瘤細(xì)胞和小鼠H22肝癌細(xì)胞，通過(guò)觀察荷瘤小鼠的生存期、腫瘤生長(zhǎng)情況、檢測(cè)血清細(xì)胞因子TNf-α、IFN-γ的含量來(lái)評(píng)價(jià)不同治療方法的抗腫瘤療效。 結(jié)果 1 初次接種S180肉瘤細(xì)胞的小鼠，經(jīng)過(guò)冷凍、免疫治療后，冷凍治療組有1例治愈(1/40)，冷凍+免疫治療組有1例治愈(1/

3、40)。 2 腫瘤細(xì)胞二次接種后荷瘤后小鼠的生存期 2.1二次接種S180肉瘤細(xì)胞后小鼠的生存期(天)A組小鼠的平均生存期為：91.3±6.83，B組為：92.5±10.51，C組為：114.4±9.08，D組為：59.7±9.17。A組、B組、C組小鼠的平均生存期均較D組明顯延長(zhǎng)，與D組相比，組間均有顯著性差異(P<0.01)；B組小鼠的平均生存期較A組長(zhǎng)，但組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；C組小鼠的平均生存期較

4、A組長(zhǎng)，組間比較有顯著性差異(P<0.01)：C組小鼠的平均生存期較B組長(zhǎng)，組間比較有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果表明：通過(guò)冷凍治療、免疫治療、冷凍聯(lián)合免疫治療均可以有效提高荷瘤小鼠抵抗同種腫瘤細(xì)胞再次攻擊的能力，延長(zhǎng)小鼠的生存期。而冷凍聯(lián)合免疫治療效果更好。 2.2二次接種H22肝癌細(xì)胞后小鼠的生存期(天)A組小鼠的平均生存期為：44.6±4.45，B組為：55.5±3.98，C組為：72.1±5.74，D組為：42.3±

5、6.67。B組、C組小鼠的平均生存期均較D組小鼠延長(zhǎng)，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)；A組小鼠的平均生存期較D組小鼠延長(zhǎng)，但組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；B組小鼠的平均生存期較A組長(zhǎng)，組間比較有顯著性差異(P<0.01)；C組小鼠的平均生存期較A組長(zhǎng)，組間比較有顯著性差異(P<0.01)；C組的小鼠平均生存期較B組長(zhǎng)，組間比較有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)果表明：通過(guò)冷凍治療、免疫治療、冷凍聯(lián)合免疫治療均可提

6、高荷瘤小鼠抵抗異種腫瘤細(xì)胞攻擊的能力，延長(zhǎng)小鼠的生存期，而冷凍聯(lián)合免疫治療效果好，單純冷凍治療的效果差。 3 荷瘤小鼠二次接種瘤細(xì)胞后腫瘤的生長(zhǎng)情況 3.1荷瘤小鼠二次接種S180肉瘤細(xì)胞后腫瘤生長(zhǎng)情況二次接種S180肉瘤細(xì)胞后，A組、B組、D組小鼠左后肢腋部皮下均有腫瘤生長(zhǎng)，C組2例小鼠未見(jiàn)腫瘤生長(zhǎng)。 結(jié)果表明：通過(guò)冷凍治療、免疫治療、冷凍聯(lián)合免疫治療，荷瘤小鼠對(duì)二次接種的同種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，而

7、冷凍聯(lián)合免疫治療效果更好。 3.2荷瘤小鼠二次接種H22肝癌細(xì)胞后腫瘤生長(zhǎng)情況二次接種H22肝癌細(xì)胞后，四組均有腫瘤生長(zhǎng)。A組小鼠的平均瘤體重量(g)為：1.331±0.1264，抑瘤率為：7.51％；B組小鼠的平均瘤體重量(g)為：1.436±0.1639，抑瘤率為：0.21％；C組小鼠的平均瘤體重量(g)為：0.921±0.1007，抑瘤率為：36.00％；D組小鼠的平均瘤體重量(g)為：1.439±0.2045。C組小鼠的

8、平均瘤體重量較D組輕，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)；A組、B組小鼠的平均瘤體重量較D組輕，但組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；A組小鼠的平均瘤體重量較B組輕，但組間比較無(wú)顯著差異(P>0.05)；C組小鼠的平均瘤體重量較A組輕，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)；C組小鼠的平均瘤體重量較B組輕，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)果表明：通過(guò)冷凍聯(lián)合免疫治療后，荷瘤小鼠對(duì)二次接種的異種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有一定

9、抑制作用。而通過(guò)單純冷凍治療、免疫治療后，荷瘤小鼠對(duì)二次接種的異種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)未見(jiàn)明顯抑制作用。 4 荷瘤小鼠二次接種腫瘤細(xì)胞后血清INF-γ的含量情況 4.1荷瘤小鼠二次接種S180肉瘤細(xì)胞后血清INF-γ的含量情況(pg/ml)A組小鼠血清INF-γ的平均含量為：11.231±1.466，B組為：12.042±2.420，C組為：18.163±3.347，D組為：4.871±2.279。A組、B組、C組小鼠血清。IN

10、F-γ的平均含量均較D組高，組間比較均具有顯著性差異(P<0.01)；B組小鼠血清INF-γ的平均含量較A組高，但組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；C組小鼠血清INF-γ的平均含量較A組高，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)；C組小鼠血清INF-γ的平均含量較B組高，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)果表明：對(duì)荷瘤小鼠分別進(jìn)行冷凍治療、免疫治療、冷凍聯(lián)合免疫治療后，二次接種同種腫瘤細(xì)胞，荷瘤小鼠血清INF-γ的

11、平均含量均較對(duì)照組高，冷凍聯(lián)合免疫治療效果更明顯。 4.2荷瘤小鼠二次接種H22肝癌細(xì)胞后血清INF-γ的含量情況(pg/ml)A組小鼠血清INF-γ的平均含量為：9.171±1.443，B組為：9.448±1.639，C組為：13.096±1.618，D組為：4.506±1.968。A組、B組、C組小鼠血清INF-γ的平均含量均較D組高，組間比較均具有顯著性差異(P<0.01)；B組小鼠血清INF-γ的平均含量較A組高，但組間

12、比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；C組小鼠血清INF-γ的平均含量較A組高，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)；C組小鼠血清1NF-γ的平均含量較B組高，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)果表明：對(duì)荷瘤小鼠分別進(jìn)行冷凍治療、免疫治療、冷凍聯(lián)合免疫治療后，二次接種異種腫瘤細(xì)胞，荷瘤小鼠血清INF-γ的平均含量均高于對(duì)照組，冷凍聯(lián)合免疫治療效果更明顯。 5 荷瘤小鼠二次接種腫瘤細(xì)胞后血清TNF-α的含量情況

13、 5.1荷瘤小鼠二次接種小鼠S180肉瘤細(xì)胞后血清TNF-α的含量情況(pg/ml) A組小鼠血清TNF-α的平均含量為：6.674±0.958，B組為：8.118±0.835，C組為：10.043±0.762，D組為：4.661±0.463。A組、B組、C組小鼠血清TNF-α的平均含量均較D組高，組間比較均具有顯著性差異(P<0.01)；B組小鼠血清TNF-α的平均含量較A組高，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)，C組小鼠血清

14、TNF-α的平均含量較A組高，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)；C組小鼠血清TNF-α的平均含量較B組高，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果表明：對(duì)荷瘤小鼠分別進(jìn)行冷凍治療、免疫治療、冷凍聯(lián)合免疫治療后，二次接種同種腫瘤細(xì)胞，荷瘤小鼠血清TNF-α的平均含量均高于對(duì)照組，冷凍聯(lián)合免疫治療后效果更明顯。 5.2荷瘤小鼠二次接種小鼠H22肝癌細(xì)胞后血清TNF-α的含量情況(pg/ml)A組小鼠血清TNF-α的平均含

15、量平均為：8.810±0.673，B組為：9.231±0.861，C組為：11.789±1.079，D組為：5.196±1.855。A組、B組、C組小鼠血清TNF-α的平均含量均較D組高，組間比較均具有顯著性差異(P<0.01)；B組小鼠血清TNF-α的平均含量較A組高，但組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；C組小鼠血清TNF-α的平均含量較A組高，組間比較具有顯著性差異(P<0.01)；C組血清TNF-α的平均含量較B組高，組間比較

16、具有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)果表明：對(duì)荷瘤小鼠分別進(jìn)行冷凍治療、免疫治療、冷凍聯(lián)合免疫治療后，二次接種異種腫瘤細(xì)胞，荷瘤小鼠血清TNF-α的平均含量均高于對(duì)照組，冷凍聯(lián)合免疫治療后效果更明顯。 結(jié)論 1 小鼠S180肉瘤通過(guò)單純冷凍治療后，有一定治愈率，并能延長(zhǎng)小鼠的生存期。 2 冷凍治療小鼠S180肉瘤后，可以提高小鼠機(jī)體抗腫瘤免疫，有效控制了同種腫瘤細(xì)胞二次接種后腫瘤的發(fā)展，抑制了腫瘤的生長(zhǎng)，

17、延長(zhǎng)了荷瘤小鼠的生存期。一定程度上控制了異種腫瘤細(xì)胞二次接種后腫瘤的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)了荷瘤小鼠的生存期。 3 白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)腹腔注射可以提高荷瘤小鼠的抗腫瘤免疫，有效抑制了同種腫瘤細(xì)胞二次接種后腫瘤的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)了荷瘤小鼠的生存期。一定程度上抑制了異種腫瘤細(xì)胞的二次接種后腫瘤的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)了荷瘤小鼠的生存期。 4 圍冷凍手術(shù)期配合IL-2協(xié)同治療，有效的提高了同種和異種腫瘤細(xì)胞二次接種后荷瘤