銀芩膠囊、芩連膠囊及rHuGM-CSF抗流感病毒實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究系統(tǒng)地應(yīng)用狗腎細(xì)胞(MDCK細(xì)胞)模型和小鼠模型對中藥復(fù)方銀芩膠囊和芩連膠囊及重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rHuGM-CSF)進(jìn)行了體內(nèi)、外的抗流感病毒作用的實(shí)驗(yàn)研究。 體外實(shí)驗(yàn)以MDCK細(xì)胞為模型，采用MTT法檢測藥物對細(xì)胞存活率的影響，即藥物毒性濃度測定；以藥物對流感病毒導(dǎo)致的細(xì)胞病變(Cytopathiceffect，CPE)的抑制率為指標(biāo)，確定藥物體外抗流感病毒有效濃度。結(jié)果顯示，銀芩膠囊和芩連膠囊在體外均可

2、有效抑制流感病毒相關(guān)CPE的形成。銀芩膠囊的最大無毒濃度(TCo)為1.25mg/mL，50﹪毒性濃度(TCso)為89mg/mL，對流感病毒50﹪有效抑制濃度(ICso)為0.4mg／mL，治療指數(shù)(TI)達(dá)2.25。芩連膠囊的TCo為125μg/mL，TCso為281.8μmg/mL，ICso為67.0μmg/mL，Tl值為4.2。考慮到rHuGM-CSF是通過受體細(xì)胞發(fā)揮牛物學(xué)活性，因此采用從人抗凝靜脈血中分離的外周血單個(gè)核細(xì)胞(

3、PBMC)為受體細(xì)胞，將PBMC在體外與rHuGM-CSF共培養(yǎng)3天后，收集細(xì)胞上清液進(jìn)行抗流感病毒體外實(shí)驗(yàn)．結(jié)果顯示，PBMC與80μmg/mL及以上濃度的rHuGM-CSF共培養(yǎng)后，其細(xì)胞上清對CPE的抑制率可超過50﹪。rHuGM-CSF的TCo為200μmg/mL，TCso為309.0μg／mL，Icso為64.4μg／mL，Tl值為4.8。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以昆明種小鼠為動(dòng)物模型，小鼠感染病毒后2小時(shí)開始給藥，銀芩膠囊和芩連膠

4、囊都采用口服給藥(銀芩膠囊每日2次，芩連膠囊每日1次)，共連續(xù)給藥六天，從感染之日起連續(xù)觀察14天。rHuGM-CSF采用預(yù)防性治療給藥的方式，在小鼠感染病毒前先滴鼻給藥7天，每日1次，接種病毒后再滴鼻給藥3天，從感染之日起連續(xù)觀察14天。通過流感病毒感染小鼠的死亡率、牛命延長情況及肺病變程度指標(biāo)判定其抗流感病毒作用。結(jié)果表明，試驗(yàn)藥物均能減少流感病毒感染小鼠的死亡率，延長存活時(shí)間，減輕小鼠肺組織病變程度?？诜?.0、0.3和0.1g/

5、kg/d銀芩膠囊，對流感病毒感染小鼠的死亡保護(hù)率分別為40﹪、20﹪和5﹪，牛命延長率分別為66.1﹪、32.7﹪和24.8﹪，減輕小鼠肺病變分別為76.9﹪、53.9﹪和38.5﹪?？诜?、2、l、0.5和O.25g／kg/d芩連膠囊，對流感病毒感染小鼠的死亡保護(hù)率分別為40﹪、30﹪、30﹪、20﹪和O﹪，牛命延長率分別為83.2﹪、70.1﹪、64.5﹪、40.2﹪和7.5﹪，口服芩連膠囊4、1和0.5g／kg／d，減輕小鼠肺病變

6、分別為51.4﹪、25.8﹪和8.2﹪。鼻腔途徑給予1.34、0.67和0.34mg／kg/d的rHuGM-CSF，對流感病毒感染小鼠的死亡保護(hù)率分別為80﹪、55﹪和50﹪，牛命延長率分別為115.8﹪、74.6﹪和65.8﹪，減輕小鼠肺病變分別為40.0﹪、34.8﹪和4.8﹪。 以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，銀芩膠囊和芩連膠囊具有直接抑制流感病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的作用，并且對模型小鼠的病毒性肺炎療效顯著，能有效降低感染小鼠的死亡率，延