芩丹膠囊對(duì)老年自發(fā)性高血壓大鼠血管外膜重構(gòu)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 1.觀察芩丹膠囊對(duì)SHR大鼠主動(dòng)脈壁形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的改變，及對(duì)大鼠血壓的影響。
　　 2.觀察芩丹膠囊對(duì)血管外膜TGF-β1、SMα-actin表達(dá)的影響及二者之間的關(guān)系，探討芩丹膠囊逆轉(zhuǎn)高血壓血管外膜重構(gòu)的機(jī)制。方法
　　 1.研究對(duì)象：40周齡雄性SHR大鼠32只和40周齡Mistar-Kyoto大鼠(WKY)16只。隨機(jī)分為6組，每組8只：(1) WKY對(duì)照組；(2) WKY+芩丹膠囊大劑量

2、組(WKY+QCH)；(3) SHR對(duì)照組；(4) SHR+芩丹膠囊大劑量組(SHR+QCH)；(5) SHR+芩丹膠囊小劑量組(SHR+QCL)；(6) SHR+氯沙坦組（SHR+Losartan）。WKY+QCH組給予芩丹膠囊750mg/( kg·d)，SHR+QCH組給予給予芩丹膠囊750mg/(kg·d)，SHR+QCL組給予芩丹膠囊150mg/(kg·d)，SHR+Losartan組給予氯沙坦30mg/(kg·d)。WKY對(duì)照

3、組和SHR對(duì)照組分別給予等量生理鹽水。各組大鼠均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥12周。各組大鼠于末次給藥后禁食24 h，不禁水。3％戊巴比妥鈉（30mg/kg，腹腔注射）麻醉后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　 2.研究?jī)?nèi)容：(1)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓測(cè)定；(2)胸主動(dòng)脈壁病理學(xué)觀察以及外膜細(xì)胞核密度變化；(3)胸主動(dòng)脈壁形態(tài)學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：激光共聚焦顯微鏡觀測(cè)胸主動(dòng)脈內(nèi)徑（luminal diameter，LD）、中膜(medial thicknes

4、s，MT)、外膜的比例變化；(4)免疫組化法觀察以及實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)胸主動(dòng)脈外膜TGF-β1、SMα-actin的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組大鼠治療前后收縮壓動(dòng)態(tài)變化。
　　 與40周齡正常血壓對(duì)照組WKY大鼠比較，40周齡SHR各組大鼠血壓已經(jīng)明顯升高(P＜0，01)。SHR組大鼠收縮壓在實(shí)驗(yàn)過程中呈持續(xù)升高狀態(tài)。從給藥第4周起，芩丹膠囊大、小劑量組、氯沙坦組大鼠的血壓與模型組相比均有下降，其差異具

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。給藥7周后，芩丹膠囊大劑量組較之小劑量組血壓下降更為顯著(P＜0.05)，給藥12周后，各給藥組大鼠收縮壓與SHR組相比均有明顯下降(P＜0.05)，但各組下降程度不同；其中芩丹膠囊小劑量組下降程度最小，氯沙坦組下降程度最大，兩組相比差異具有顯著性(P＜0.05)(見表1)。
　　 2.胸主動(dòng)脈壁切片光鏡下HE染色觀察。
　　 對(duì)照組WKY大鼠胸主動(dòng)脈血管壁內(nèi)膜、中膜、外膜三層結(jié)構(gòu)明顯，均無

6、增厚；外膜厚度均一，細(xì)胞排列致密有序，無細(xì)胞增生，血管壁無增厚。SHR組大鼠外膜細(xì)胞增生活躍，血管管壁增厚，有些出現(xiàn)斷裂、剝脫，內(nèi)彈力層破壞，內(nèi)徑、中膜、外膜比值降低，細(xì)胞核密度明顯增加。QC（qindan capsule）組、氯沙坦組病理改變較少，但較WKY仍有明顯差異。（見圖1）
　　 3.胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)指標(biāo)比較。
　　 (1)與40周齡正常血壓對(duì)照組WKY大鼠相比，40周齡SHR組大鼠主動(dòng)脈MT明顯增加（P＜0.0

7、1）。與SHR組相比，SHR+QCL組大鼠主動(dòng)脈MT略有下降(P＜0.05)；SHR+QCH組、SHR+Losartan組則下降明顯(P均＜0.01)，但三組之間差異無顯著性(P均＞0.05)。
　　 (2)與40周齡正常血壓對(duì)照組WKY大鼠相比，SHR組及各給藥組大鼠主動(dòng)脈LD雖有不同程度下降，但差異無顯著性(P均＞0.05)。
　　 (3)與對(duì)照組WKY大鼠相比，SHR組大鼠主動(dòng)脈MT/LD顯著增加（P＜0.01）。

8、與SHR組相比， SHR+QCH、SHR+QCL、SHR+Losartan組三組MT/LD下降明顯(P均＜0.05)，但三組之間差異無顯著性(P均＞0.05)。
　　 (4)與40周齡正常血壓對(duì)照組WKY大鼠相比，40周齡SHR組大鼠主動(dòng)脈外膜明顯增厚(P＜0.01)。與SHR組相比， SHR+QCH組、SHR+QCL組和SHR+Losartan組下降明顯(P均＜0.01)，但三組之間差異無顯著性(P均＞0.05)。(5)與對(duì)照

9、組WKY大鼠相比，SHR組大鼠主動(dòng)脈LD/ MT/ AT比值顯著降低(P＜0.01)。與SHR組相比， SHR+QCH、SHR+QCL、SHR+Losartan組三組LD/MT/AT下降則不明顯(P均＜0.05)，且三組之間差異無顯著性(P均＞0.05)(見表2)。
　　 4.胸主動(dòng)脈壁切片光鏡下免疫組化觀察。
　　 免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示，TGF-βi為胞漿表達(dá)，胞漿內(nèi)棕黃色顆粒為TGF-βi抗原抗體復(fù)合物；切片于光鏡下

10、×400放大，經(jīng)計(jì)算機(jī)圖像分析儀隨機(jī)選擇8個(gè)視野，計(jì)算TGF-βi光密度值，結(jié)果顯示，SHR組較WKY組TGF-βi表達(dá)明顯增多；SHR+QCH組，SHR+QCL組，氯沙坦組表達(dá)較SHR組均減少，但較WKY組明顯(P＜0.05，見圖2)。SMα-actin亦為胞漿表達(dá)，觀測(cè)結(jié)果顯示，WKY組外膜SMα-actin幾乎不表達(dá)，而SHR組則明顯增多，SHR+QCH組，SHR+QCL組，氯沙坦組表達(dá)較SHR組均減少，但較WKY組明顯（P＜0.

11、05，見圖3）。
　　 5.主動(dòng)脈壁TGF-β1、SMα-actin mRNA表達(dá)水平比較。
　　 (1) TGF-β1mRNA表達(dá)比較：與40周齡的WKY組大鼠相比，同周齡的SHR組大鼠血管壁TGF-β1mRNA表達(dá)顯著升高（P＜0.05）。與SHR組相比，SHR+QCH組、SHR+QCL、SHR+Losartan組TGF-β1mRNA表達(dá)顯著下降(P均＜0.05)(見表3)。
　　 (2) SMα-actin

12、 mRNA表達(dá)比較：與40周齡的WKY組大鼠相比，同周齡的SHR組大鼠血管壁SMα-actin mRNA表達(dá)顯著升高（P＜0.01）。與SHR組大鼠相比，SHR+QCH組、SHR+QCL、SHR+Losartan組SMα-actin mRNA與SHR無顯著性差異(P均＞0.05)（見表4）。結(jié)論
　　 芩丹膠囊對(duì)SHR大鼠具有顯著的降壓療效，其降壓機(jī)制與芩丹膠囊降低SHR大鼠TGF-β1、SMα-actin水平有關(guān)，同時(shí)與逆轉(zhuǎn)血