血管緊張素Ⅱ—1型受體shRNA對自發(fā)性高血壓大鼠血壓作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、血管緊張素Ⅱ-1型受體shRNA對自發(fā)性高血壓大鼠血壓及組織AT1R基因表達(dá)的影響 目的：觀察以重組腺病毒為載體的血管緊張素Ⅱ-1型受體的shRNA(Ad5-AT1R-shRNA)對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的作用及對組織AT1R基因表達(dá)的影響。 方法：在293細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增已構(gòu)建好的熒光蛋白標(biāo)記的攜帶AT1RshRNA的重組腺病毒(Ad5-AT1R-shRNA)，TCID50法測定重組腺病毒滴度。22只自發(fā)性高血壓大鼠(sp

2、ontaneouslyhypertensiverat，SHR)隨機(jī)分為2組，實(shí)驗(yàn)組(n=11)和高血壓對照組(n=11)，另設(shè)11只Wistar-Kyoto大鼠(WKY)為正常血壓對照組，實(shí)驗(yàn)組SHR經(jīng)鼠尾靜脈單次注射Ad5-AT1R-shRNA，Ad5-AT1R-shRNA經(jīng)TCID50法測定感染性滴度為1.7×109TCID50/ml，高血壓對照組和正常血壓對照組經(jīng)鼠尾靜脈單次注射對照重組復(fù)制缺陷型腺病毒(Ad5-EGFP)，感染性

3、滴度為7.9×109TCID50/ml。注射前及注射后每天定時(shí)監(jiān)測血壓及心率，于血壓出現(xiàn)明顯下降時(shí)處死部分動(dòng)物，取出心臟、肝臟、腎臟、主動(dòng)脈及腎上腺組織，在熒光顯微鏡下觀察心臟、肝臟、腎臟、主動(dòng)脈及腎上腺組織對Ad5-AT1R-shRNA的吸收情況，采用熒光定量PCR檢測肝臟、腎臟及主動(dòng)脈組織AT1RmRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)開始24小時(shí)后，給予Ad5-AT1R-shRNA的實(shí)驗(yàn)組SHR收縮壓出現(xiàn)明顯下降，最大降壓幅度可達(dá)

4、28.902mmHg，與SHR組比較有顯著性差異(P＜0.05)，此后降壓作用可持續(xù)5天，最長可持續(xù)7天；注射Ad5-EGFP后的SHR組和WKY組血壓均未見明顯下降，SHR組血壓有的可見繼續(xù)升高；三組動(dòng)物的心率變化不明顯；腎臟、心臟、肝臟、主動(dòng)脈、及腎上腺組織在熒光顯微鏡下可見大量熒光表達(dá)；實(shí)驗(yàn)組SHR腎臟及主動(dòng)脈AT1R的mRNA表達(dá)量明顯低于SHR組(P＜0.01)； 結(jié)論：Ad5-AT1R-shRNA經(jīng)靜脈注射后可被許多

5、重要臟器吸收，且對SHR的AT1R起到RNA干擾的作用，在mRNA水平抑制AT1R的基因表達(dá)；Ad5-AT1R-shRNA通過阻抑AT1R生成對SHR可起到明顯且持久的降壓作用。 二、血管緊張素Ⅱ-1型受體shRNA對自發(fā)性高血壓大鼠左心室重構(gòu)的影響 目的：觀察通過重復(fù)注射以重組腺病毒為載體的血管緊張素Ⅱ-1型受體的shRNA對自發(fā)性高血壓大鼠血壓及心室重構(gòu)的影響。 方法：12只SHR隨機(jī)分為2組，實(shí)驗(yàn)組和高血壓

6、對照組，另設(shè)6只WKY為正常血壓對照組，實(shí)驗(yàn)組經(jīng)鼠尾靜脈注射已構(gòu)建好的Ad5-AT1R-shRNA，高血壓對照組和正常血壓對照組注射對照重組腺病毒(Ad5-EGFP)，分別共注射兩次，于注射前及注射后定時(shí)測量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)，觀察重復(fù)注射Ad5-AT1R-shRNA對SHR血壓的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱量大鼠體重、全心重量及二者的比值，生物學(xué)方法測量左室心肌羥輔胺酸含量及膠原蛋白含量，并結(jié)合透射電子顯微鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)的改變。

7、 結(jié)果：注射Ad5-AT1R-shRNA前實(shí)驗(yàn)組和高血壓對照組血壓均顯著高于正常血壓對照組(P＜0.01)，二次注射后實(shí)驗(yàn)組血壓都出現(xiàn)明顯下降，且第二次注射后的降壓效持續(xù)時(shí)間較第一次長，而高血壓對照組和正常血壓對照組均未出現(xiàn)明顯的血壓下降；實(shí)驗(yàn)組大鼠與高血壓對照組比較體重?zé)o顯著性差異(P＞0.05)，而全心重量和心重/體重有顯著性差異(P＜0.05)；高血壓對照組心肌羥輔胺酸含量及膠原蛋白含量較正常血壓對照組升高(P＜0.01)，而