FEN1在胃癌中的表達及對預后的影響.pdf

1、目的：
　　胃癌為全球第4大常見的惡性腫瘤，同時也是第2大腫瘤相關的致死性疾病。能顯示胃癌患者預后的生物標志物正成為一個研究熱點。瓣狀內切核酸酶1(flapendonuclease1，FEN1)是一種結構特異性的核酸酶，它主要參與堿基切除修復(baseexcision repair, BER)中的長片段切除修復(Long patch base excision repair，LP-BER)，同時還參與DNA復制叉的維持和促進細胞凋

2、亡誘導的DNA片段生成，DNA復制時岡崎片斷成熟過程中RNA引物的切除，DNA二級結構的分解等過程。在細胞的惡性轉化過程中，體內外的致癌因素共同作用，導致了基因組DNA發(fā)生了廣泛性損傷，基因組不穩(wěn)定性逐漸上升。作為堿基切除修復中長片段切除修復通路的重要分子，FEN1可以參與到對DNA損傷的修復過程中來。有大量的研究表明，FEN1在很多腫瘤，如:肺癌、胰腺癌、神經母細胞瘤、胃癌、前列腺癌中皆存在高表達，并在腫瘤患者的預后中具有重要的標志物

3、作用。有學者通過免疫組化對高加索胃癌人群中FEN1表達進行分析:FEN1高表達的胃癌患者T分期高，淋巴結轉移陽性率高，疾病特異性生存期(Disease specific survival，DSS)及無病生存期（Disease free survival，DFS）短。但目前對于東方人群中FEN1與胃癌的預后的關系仍無相關報道。
　　在本研究中，我們利用免疫組織化學方法通過研究FEN1在胃癌術后患者的石蠟切片中表達水平，探索FEN1在

4、胃癌中的表達與臨床病理參數的關系及對胃癌術后患者預后的影響。
　　方法：
　　收集2006年5月至2008年9月于中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院行胃癌根治術的136例中晚期原發(fā)性胃癌石蠟組織標本，制作成組織芯片。所有患者均未行內鏡下黏膜切除術、姑息性切除術及術前化療，均具備詳細的臨床資料，腫瘤按照AJCC(American Joint Committee on Cancer)（第7版）標準確定分期。所有患者均采用電話隨訪，隨訪日期

5、從患者手術之日，每年隨訪一次，數據隨訪時間截止到2011年7月，總生存期(OS)設定為自手術當日至患者死亡、隨訪結束或失訪的時間。經過中位時間為34.30個月（4-62個月）的隨訪后，136例胃癌患者內66例患者(48.5％)仍然生存;70例患者(51.5％)死于疾病進展。所有石蠟組織標本均由中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科獲得，切片的組織病理學特征由3名病理學家分別判讀。
　　將136例胃癌組織標本制作成組織芯片，FEN1的檢測應

6、用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(S-P)法，實驗步驟嚴格按照說明書進行操作，并用PBS代替一抗作陰性對照。
　　在鏡下一個組織微陣列內記錄FEN1陽性的細胞染色強度及所占百分比并記錄評分:染色強度評分:0-3分（0，陰性;1，淡黃色;2，棕黃色;3，棕褐色）。陽性細胞百分比（0，無陽性細胞;1，＜10％陽性細胞;2，11-50％陽性細胞;3，51-80％陽性細胞;4，＞80％陽性細胞）。并將得分相乘計算最終得分（陰性，0

7、-1;弱陽性，1-2;中等陽性，2-3;強陽性，≥3）。將＞1分均設定為陽性，最終結果選取芯片兩點得分平均值記錄。
　　所有數據統(tǒng)計均采用SPSS20.0進行分析，①采用X2檢驗分析比較FEN1蛋白表達與胃癌患者疾病特征（性別，年齡，分化程度，D2切除與否，Lauren分型，腫瘤位置，TNM分期，腫瘤原發(fā)灶情況，淋巴結轉移情況及是否有遠處轉移等）的關系;②生存數據分析采用Kaplan-Meier法及Log-rank檢驗;③采用CO

8、X模型對胃癌患者預后相關因素進行多因素回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，所有檢驗和P值均為雙側。
　　結果：
　　1、中晚期原發(fā)性胃癌術后患者樣本一共136例。其中男性102人，占75.0％，女性34人，占25.0％;年齡38-78歲，中位年齡60歲。其中＜60歲66人，占48.5％，≥60歲70人，占51.5％;腫瘤分化程度好4例，占2.9％，中等30例，占22％，分化程度差100例，占73.5％，有2例缺失;未行

9、D2切除5例，占3.7％，行D2切除131例，占96.3％; Lauren分型中腸型59例，占43.4％，彌漫型77例，占56.6％;腫瘤位于胃底及胃角處8例，占5.9％，位于胃體35例，占25.7％，位于幽門及胃竇處93例，占68.4％; TNM分期Ⅰ期5例，占3.7％，Ⅱ期25例，占18.4％，Ⅲ期101例，占74.3％，Ⅳ期4例，占2.9％;其中T分期pT11例，占0.7％，pT210例，占7.4％，pT317例，占12.5％，

10、pT4期107例，占78.7％，有1例缺失;無淋巴結轉移31例，占22.8％，pN120例，占14.7％，pN233例，占24.3％，pN352例，占38.2％，;無遠處轉移132例，占97.1，遠處轉移4例，占2.9％。
　　2、鏡下FEN1蛋白陽性表達為棕黃色顆粒，主要位于細胞核，極少部分見于細胞漿。136名胃癌患者中有87人FEN1蛋白表達陽性，陽性表達率為64.0％。
　　3、通過X2檢驗分析得到FEN1蛋白的表達僅

11、與淋巴結轉移情況呈正相關(p=0.013);而與患者的性別、年齡、分化程度、D2切除與否、Lauren分型、腫瘤位置、TNM分期及腫瘤原發(fā)灶情況等的相關性無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4、Kaplan-Meier生存曲線分析結果顯示FEN1蛋白表達陽性患者的中位生存時間為34.30個月，而陰性組中位生存時間沒有達到。FEN1蛋白表達陽性患者的總生存期(OS)較陰性組縮短(P=0.009)。將FEN1表達、性別，年齡，分化程度

12、，D2切除與否，Lauren分型，腫瘤位置，腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及遠處轉移納入COX比例風險模型進行單因素分析。結果顯示:FEN1表達(P=0.011)、TNM分期(P＜0.001)、腫瘤浸潤深度(P=0.004)及淋巴結轉移(P=0.002)均為影響腫瘤患者預后的因素。將以上影響因素納入到多因素分析，結果顯示:FEN1表達(P=0.022)及TNM分期(P＜0.001)均為影響胃癌患者預后的獨立性因素。進一步對不同的臨床病理參數間

13、FEN1表達對預后的影響進行亞組分析示，在Ⅲ-Ⅳ期、pT4及pN1-3的患者中，FEN1陽性患者較FEN1陰性患者預后更差;在Ⅰ-Ⅱ期、pT1-3及pN0的患者中，FEN1陽性患者預后與FEN1陰性組患者差異不明顯。而在芯片分化程度、Lauren分型、腫瘤部位的不同參數間FEN1表達陽性的患者預后均較差。
　　結論：
　　1、胃癌組織中FEN1蛋白的表達與淋巴結轉移的相關性具有統(tǒng)計學意義，提示FEN1表達與胃癌患者的惡性生物