CXCR4及FOXP3在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞上的表達(dá)及其對化療敏感性的研究.pdf

1、[背景與目的]趨化因子是一類能夠引起白細(xì)胞直接遷移的細(xì)胞因子，趨化因子及其受體之間形成一種復(fù)雜的趨化因子網(wǎng)絡(luò)，影響腫瘤細(xì)胞的生長、存活、遷移、血管形成以及腫瘤部位的白細(xì)胞浸潤。CXCR4是最常見的一種高表達(dá)于不同類型惡性腫瘤細(xì)胞上的趨化因子受體。CXCR4與其配體CXCL12(又名SDF-1)結(jié)合，構(gòu)成SDF-1/CXCR4生物學(xué)軸，廣泛參與腫瘤的趨向性侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后。
　　 神經(jīng)母細(xì)胞瘤是兒童最常見的顱外惡性實體瘤，其惡性程

2、度高，可發(fā)生早期多處轉(zhuǎn)移，研究提示趨化因子受體CXCR4在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞表面的表達(dá)異常是導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移浸潤的重要因素。
　　 除了趨化因子受體的異常表達(dá)外，腫瘤細(xì)胞對體內(nèi)免疫監(jiān)視系統(tǒng)的逃逸也是其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一。眾多研究表明，F(xiàn)oxp3，一種抑制機(jī)體免疫應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄因子，廣泛參與了腫瘤細(xì)胞的免疫逃避過程。深入探討Foxp3在腫瘤組織中的表達(dá)及其意義也是本領(lǐng)域研究的熱點之一。
　　 基于以上資料，為了深入認(rèn)識神

3、經(jīng)母細(xì)胞瘤的生物學(xué)規(guī)律，本研究以LA-N-5及SK-N-SH細(xì)胞為研究對象，探討CXCR4及Foxp3在上述兩種神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其化療藥物CTX，THP對其的影響，明確化療藥物是否能通過抑制轉(zhuǎn)移相關(guān)趨化因子受體，或通過抑制Foxp3的表達(dá)發(fā)揮作用。
　　 [材料與方法]體外培養(yǎng)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系LA-N-5及SK-N-SH；常規(guī)流式細(xì)胞術(shù)(FACS)方法測定CXCR4在上述兩種細(xì)胞中的表達(dá)；用細(xì)胞內(nèi)染色的方法檢測Fox

4、p3在上述兩種細(xì)胞中的表達(dá)；MTT試驗明確化療藥物CTX，THP對兩種細(xì)胞的效應(yīng)劑量；最后通過實時定量PCR方法(Real-time PCR)，在基因水平檢測化療藥物對上述腫瘤細(xì)胞中CXCR4及腫瘤耐受相關(guān)分子Foxp3表達(dá)的變化。
　　 [結(jié)果]
　　 1.FACS結(jié)果顯示LA-N-5及SK-N-SH兩種神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞均高表達(dá)CXCR4分子(圖1)。
　　 2.FACS結(jié)果顯示，化療藥物CTX，THP顯著降低

5、了LA-N-5細(xì)胞上CXCR4的表達(dá)，加藥組細(xì)胞CXCR4的平均熒光強(qiáng)度顯著低于未加藥對照組(p<0.05)(圖3A)。而化療藥物CTX，THP以及二者聯(lián)合的情況下，均未顯著影響神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH上CXCR4的表達(dá)(p>0.05)(圖3B)。
　　 3.Real-time PCR結(jié)果顯示化療藥物CTX本身未表現(xiàn)出降低CXCR4表達(dá)的效果，而THP或THP與CTX合用的情況下顯著降低了LA-N-5細(xì)胞中CXCR4的表達(dá)，(

6、P<0.01)。
　　 4.FACS結(jié)果顯示LA-N-5，SK-N-SH兩種神經(jīng)母細(xì)胞瘤內(nèi)均高表達(dá)Foxp3分子(圖2-1)。
　　 5.化療藥物CTX，THP顯著降低了LA-N-5上Foxp3分子的平均熒光強(qiáng)度(P<0.05)，而上述化療藥物對SK-N-SH細(xì)胞內(nèi)Foxp3分子的熒光強(qiáng)度沒有顯著的影響(圖2-2)。
　　 6.Real-time PCR結(jié)果顯示CTX顯著降低了Foxp3在LA-N-5細(xì)胞中的表達(dá)