抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體增強(qiáng)姜黃素對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌抑制效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分姜黃素對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌體外抑制效應(yīng)的研究
　　 目的:了解姜黃素在體外對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞的抑制效應(yīng)。
　　 方法:采用不同濃度的姜黃素（6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）作用于雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞，MTT法檢測(cè)姜黃素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)活性的影響。然后分別采用CFSE染色、Annexin V-PI染色和PI染色法，使用流式細(xì)胞儀分析姜

2、黃素對(duì)PC-3細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響。
　　 結(jié)果:MTT結(jié)果顯示6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L 四個(gè)濃度的姜黃素處理24小時(shí)后，PC-3細(xì)胞的活性未受顯著影響；而100μmol/L的姜黃素則對(duì)PC-3細(xì)胞產(chǎn)生顯著的細(xì)胞毒性作用。50 μmol /L的姜黃素作用后，PC-3細(xì)胞的增殖指數(shù)從7.08±0.20降到 4.38±0.19 ；凋亡率從(5.34±0.96)％提高到(

3、21.53±2.87)％；G2/M期細(xì)胞比例由(34.27±1.87)％上升到(57.29±1.91)％。
　　 結(jié)論:姜黃素能在體外顯著抑制非依賴性前列腺癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并導(dǎo)致細(xì)胞周期的阻滯。
　　 第二部分姜黃素對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路活性的影響
　　 目的:明確姜黃素對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路活性的影響，探討姜黃素抗瘤效應(yīng)產(chǎn)生的可能機(jī)制。
　　 方法:采用熒光素酶

4、報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)姜黃素在體外對(duì)核因子-κB (NF-κB、激活蛋白-1 (AP-1)、Elk1、CHOP和CREB 五個(gè)信號(hào)通路的影響，以帶有熒光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒（pNF-κB-Luc，pAP-1-Luc，pElk1-Luc，pCHOP-Luc，pCREB-Luc）轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞，姜黃素干預(yù)后，檢測(cè)熒光素酶活性。
　　 結(jié)果:熒光素酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示，姜黃素能在體外顯著抑制NF-κB和AP-1 兩個(gè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的活性，而對(duì)

5、Elk1、CHOP和CREB 三個(gè)信號(hào)通路的活性影響不明顯。
　　 結(jié)論:姜黃素可能通過(guò)抑制NF-κB和AP-1 信號(hào)通路發(fā)揮抑癌效應(yīng)。
　　 第三部分抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體增強(qiáng)姜黃素對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌的抑制效應(yīng)
　　 目的:檢測(cè)抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體（TfR mAb）對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，了解抗人TfR mAb對(duì)姜黃素抗瘤作用的增強(qiáng)效應(yīng)。
　　 方法:利用雜交瘤細(xì)胞

6、株制備抗人TfR mAb，分別采用CFSE染色、Annexin V-PI染色和PI染色法檢測(cè)抗人TfR mAb對(duì)PC-3細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響。采用FITC標(biāo)記的鼠抗人TfR mAb檢測(cè)姜黃素對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體表達(dá)的影響。采用流式細(xì)胞儀進(jìn)一步檢測(cè)抗人TfR mAb聯(lián)合姜黃素對(duì)PC-3細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響。
　　 結(jié)果:抗人TfR mAb對(duì)PC-3細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期無(wú)顯著影響。姜黃