Tumstatin185-191逆轉(zhuǎn)肺腺癌化療耐藥及其對Akt、ERK活性的影響.pdf

1、目的：Tumstatin是膠原蛋白IV膠原a3鏈的C端包括非膠原區(qū)在內(nèi)約28KD大小的一個片斷，體外試驗和動物模型已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Tumstatin對包括黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、前列腺癌、喉鱗癌等在內(nèi)的多種腫瘤均有抑制作用，有望成為極具潛力的新型抗腫瘤藥物。目前Tumstaltin與肺癌的相關(guān)報道比較少見，Tumstatin對P13K/Akt及MAPK/ERK信號通路的影響尚未完全明了，Tumstatin是否與常用化療藥物存在協(xié)同作用亦有待研究。

2、本項目以體外培養(yǎng)的肺腺癌細胞株A549及耐順鉑的肺腺癌耐藥細胞株A549/DDP為研究對象，觀察Tumstatin185-191(Tum185-191)單藥、順鉑單藥及兩藥聯(lián)合應(yīng)用時對肺腺癌細胞增生與凋亡的影響，并檢測干預(yù)前后細胞中Akt與ERK的活性變化，以探討Tumstatin對肺腺癌細胞的作用及其可能作用機制。 方法：MTT法測定Tum185-191、順鉑單藥及兩藥聯(lián)合干預(yù)48小時后對A549及A549/DDP細胞增殖的影

3、響，并計算其不同藥物干預(yù)下的IC50、耐藥指數(shù)和逆轉(zhuǎn)指數(shù)；Hoechest33258 DNA染色及流式檢測分析Tum185-191及順鉑對肺癌細胞凋亡的影響；細胞免疫組織化學(xué)及Western blot檢測Tum185-191及順鉑對p-Akt、p-ERK蛋白表達的影響。 結(jié)果：Tum185-191對A549及A549/DDP細胞的增殖均有抑制作用，其IC50分別為73.67μM、80.25μM；順鉑對A549細胞的IC50為5.

4、24μM，當(dāng)其與20μM或40μM的Tum185-191聯(lián)合應(yīng)用時，順鉑對A549細胞的IC50分別下降為3.48μM、1.39μM；A549/DDP細胞相對于A549細胞對順鉑的耐藥指數(shù)為14.73；順鉑對A549/DDP細胞的IC50為77.16μM；當(dāng)順鉑與20μM的Tum185-191聯(lián)合應(yīng)用時，順鉑對A549/DDP細胞的IC50下降為57.97μM，耐藥逆轉(zhuǎn)指數(shù)為1.33；當(dāng)順鉑與40μM的Tum185-191聯(lián)合時，順鉑對

5、A549/DDP細胞的IC50為26.40μM，耐藥逆轉(zhuǎn)指數(shù)為2.92。聯(lián)合應(yīng)用Tum185-191及順鉑對A549、A549/DDP細胞凋亡的誘導(dǎo)作用均較單藥應(yīng)用時顯著增加。細胞免疫組織化學(xué)及Western blot檢測發(fā)現(xiàn)p-Akt、p-ERK在未經(jīng)干預(yù)的A549及A549/DDP細胞內(nèi)均呈高表達狀態(tài)，Tum185-191能顯著抑制p-Akt、p-ERK的表達，順鉑對P-Akt、p-ERK的表達無明顯影響，Tum185-191與順鉑

6、聯(lián)合使用并不增加Tum185-191對p-ERK、p-Akt的抑制效應(yīng)。 結(jié)論：Tum185-191單藥或聯(lián)合順鉑對于A549、A549/DDP細胞均有顯著抑制作用。Tum185-191能夠增加A549細胞對順鉑的敏感性并部分逆轉(zhuǎn)A549/DDP細胞對順鉑的化療耐藥。Tum185-191可能通過下調(diào)A549及A549/DDP細胞內(nèi)p-Akt、p-ERK水平發(fā)揮其抑制細胞生長、促進細胞凋亡的作用。Tum185-191增加細胞對順鉑