克瘟解毒制劑的安全性評價(jià)及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的建立.pdf

1、禽呼吸道疾病主要是由禽流感病毒、傳染性支氣管炎病毒、新城疫病毒、雞敗血支原體等感染所引起的一類急性、烈性呼吸道傳染病，給養(yǎng)禽業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。出口家禽呼吸道疾病長期依賴化學(xué)藥物預(yù)防和治療，其帶來的獸藥殘留、耐藥性等問題嚴(yán)重影響了我國家禽產(chǎn)品的貿(mào)易。養(yǎng)殖企業(yè)急切需要高效、低殘留的藥物來預(yù)防和治療日益嚴(yán)重的家禽呼吸道疾病。 克瘟解毒口服液來源于長期防治臨床家禽呼吸道疾病的驗(yàn)方，多年不斷的篩選和改進(jìn)逐漸獲得穩(wěn)定療效。在克瘟解毒口服液

2、處方基礎(chǔ)上，通過改進(jìn)技術(shù)工藝制成克瘟解毒顆粒。為申報(bào)克瘟解毒制劑新獸藥證書，按照《獸藥試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范匯編》(2001年版)中相關(guān)申報(bào)藥物制劑毒性、穩(wěn)定性和質(zhì)量控制要求，本研究進(jìn)行了克瘟解毒制劑的毒理學(xué)試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、定性及定量試驗(yàn)。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下： ①急性毒性試驗(yàn)選取體重18～22g的昆明小鼠50只，隨機(jī)分為5個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只，用克瘟解毒口服液的5倍濃縮液1.1g/ml灌胃，各組劑量分別0.16g/10gbw，0.21g/

3、10gbw，0.27g/10gbw，0.35g/10gbw，0.46g/10gbw，觀察給藥后動(dòng)物的中毒癥狀和異常反應(yīng)；亞慢性試驗(yàn)選取體重15～20g的昆明小鼠80只，按小鼠經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)LD50的1/5、1/10、1/20設(shè)三個(gè)劑量組，設(shè)—陰性對照組，連續(xù)灌胃28d。測定體重、血液生化指標(biāo)，觀察實(shí)質(zhì)臟器病理學(xué)變化。 ②小鼠微核試驗(yàn)選擇30只成年雄性小鼠隨機(jī)分5組，劑量分別為LD50的1/2、1/4和1/8藥物組、蒸餾水陰性對

4、照組、環(huán)磷酰胺陽性對照組，分別給藥2次，間隔24h，末次給藥后6h斷頸處死動(dòng)物，取出股骨中的骨髓細(xì)胞，顯微鏡下檢查。精子畸形試驗(yàn)試驗(yàn)分組和藥物劑量同微核試驗(yàn)，每組小鼠按上述劑量分別給藥5d，每天給藥1次。首次給藥后的第35d用脫頸椎法處死小鼠，取出兩側(cè)附睪，檢查精子的畸形率。 ③致畸試驗(yàn)選擇76只懷孕小鼠，隨機(jī)分成5組，包括3個(gè)劑量組，陰性對照組和陽性對照組。在小鼠妊娠的第18d稱體重后處死孕鼠，剖腹取出子宮，記錄黃體數(shù)、活胎數(shù)

5、、死胎數(shù)、吸收胎數(shù)及外觀畸形胎仔數(shù)，并觀察內(nèi)臟的病理學(xué)變化。 ④取克瘟解毒顆粒加蒸餾水溶解，分別進(jìn)行魚腥革、穿心蓮和柴胡的定性鑒別；以樣品中穿心蓮內(nèi)酯為定量檢測對象，檢測波長225nm，優(yōu)化條件，建立高效液相色譜法定量測定穿心蓮內(nèi)酯。 ⑤取三個(gè)批次樣品分別進(jìn)行影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和自然留樣試驗(yàn)，考察樣品外觀和測定穿心蓮內(nèi)酯含量。 結(jié)果顯示：①急性毒性試驗(yàn)表明克瘟解毒制劑口服的LD50值為25g/kg體重。亞慢性

6、毒性試驗(yàn)中克瘟解毒口服液當(dāng)給藥量小于2.5g/kg體重時(shí)，對昆明小鼠體重、生化指標(biāo)和實(shí)質(zhì)臟器無顯著影響。②小鼠微核試驗(yàn)和精子畸形試驗(yàn)均為陰性。③致畸試驗(yàn)中測定樣品致畸指數(shù)為10～100。④定性檢測顆粒樣品魚腥草、柴胡和穿心蓮，結(jié)果重現(xiàn)性好、特異性強(qiáng)；高效液相色譜法測定穿心蓮內(nèi)酯含量，其系統(tǒng)適用性好，線性關(guān)系良好。儀器的精密度、方法的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性較好，樣品中穿心蓮內(nèi)酯含量分布在160.0-165.9μg/g。⑤樣品經(jīng)影響因素試驗(yàn)、加速試

7、驗(yàn)和室溫留樣觀察，各項(xiàng)指標(biāo)均未有明顯變化，但高濕條件下樣品出現(xiàn)吸濕，重量增加；室溫保存6個(gè)月，樣品各項(xiàng)指標(biāo)未受影響。 結(jié)論：克瘟解毒口服液屬于實(shí)際無毒物質(zhì)，長期使用當(dāng)劑量達(dá)到2.5g/kg時(shí)對小鼠沒有毒性；克瘟解毒口服液無明顯的致突變作用，但有中度的致畸作用；建立的高效液相色譜法測定制劑中穿心蓮內(nèi)酯含量具有簡便快速、靈敏、定量準(zhǔn)確的特點(diǎn)，且重復(fù)性好，可作為克瘟解毒制劑的質(zhì)量控制方法；克瘟解毒顆粒在強(qiáng)光、高溫、室溫條件下6月保存其