理性設(shè)計(jì)特異性肽配基對(duì)豬心t-PA的親和色譜純化.pdf

1、組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)是一種具有廣闊應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的蛋白質(zhì)。本文利用理性設(shè)計(jì)得到的t-PA特異性肽配基QDES對(duì)豬心組織中的t-PA進(jìn)行了親和色譜純化。 通過(guò)碳二亞胺反應(yīng)將四肽配基QDES固定在商品介質(zhì)EAH Sepharose 4B上制備出了配基固定化密度為5μmol/ml的親和吸附介質(zhì)，并利用親和色譜柱考察了其吸附蛋白質(zhì)特性。通過(guò)對(duì)不同蛋白質(zhì)(α-淀粉酶、溶菌酶、胰島素)的親和吸附實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)α-淀粉酶和溶菌酶與親

2、和柱都不存在特異性親和吸附而胰島素與親和柱卻存在較高的親和吸附作用。由于胰島素與t-PA具有相似的親和位點(diǎn)，因此認(rèn)為固定化四肽配基親和色譜對(duì)t-PA也存在特異性親和吸附作用。 為了考察固定化四肽親和柱對(duì)t-PA的親和純化效果，利用新鮮豬心組織制備了丙酮粉，并經(jīng)過(guò)兩次交替抽提和鹽析后，獲得了t-PA粗提液。用Bradford法測(cè)定了粗提液中蛋白質(zhì)的含量，用纖維蛋白板溶圈法測(cè)定了粗提液中的t-PA活性，計(jì)算得出：1kg豬心組織中可得

3、丙酮粉159g；經(jīng)抽提、鹽析后獲得的t-PA粗提液的質(zhì)量收率為35.12mg/100g丙酮粉；粗提液中t-PA比活性為34037 IU/mg。 利用親和柱對(duì)t-PA粗提液進(jìn)行了親和色譜分離。通過(guò)電泳檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)一步親和純化后產(chǎn)品中t-PA純度即可達(dá)91％，比活為278110IU/mg，純化了8倍，計(jì)算其收率為1.3mg t-PA/kg豬心。對(duì)吸附的t-PA進(jìn)行不同條件下的洗脫后發(fā)現(xiàn)，t-PA與親和介質(zhì)的吸附主要是由t-PA與配基