胃癌細(xì)胞VEGF-NRP-1自分泌途徑及臨床作用的探討.pdf

1、目的：對(duì)胃癌細(xì)胞VEGF/NRP-1自分泌途徑的分析，探明其啟動(dòng)及效應(yīng)的細(xì)胞信號(hào)途徑；分析阻斷VEGF/NRP-1自分泌途徑后胃癌細(xì)胞的生物學(xué)活性，探討其臨床治療的價(jià)值。 方法：以人胃癌細(xì)胞株SCG7901為研究對(duì)象。MTT法檢測(cè)12G5對(duì)細(xì)胞粘附Matrigel的抑制作用，篩選出剛出現(xiàn)抑制作用的最小濃度用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；檢測(cè)12G5對(duì)SCG7901細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，Transwell小室進(jìn)行人工重組基底膜侵襲和運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)；臺(tái)

2、盼藍(lán)染色法檢測(cè)12G5對(duì)細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)12G5對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；RT-PCR及Western blot檢測(cè)SCG7901細(xì)胞VEGF自分泌途徑因子的mRNA和蛋白的表達(dá)，12G5對(duì)CXCR4表達(dá)的影響。 結(jié)果：12G5可使人胃癌細(xì)胞株SCG7901對(duì)基底膜粘附能力下降，濃度為10ug/ml的12G5即可使胃癌細(xì)胞粘附能力抑制，與對(duì)照組相比具有顯著意義(P<0.01、)，且隨藥物濃度的增大和時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)粘附抑制增

3、強(qiáng)。胃癌細(xì)胞株對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組侵襲遷移實(shí)驗(yàn)穿膜細(xì)胞數(shù)分別為：121.7±5.51，54.3±9.07；140.3±6.03，62.0±11.53。胃癌細(xì)胞株SCG7901實(shí)驗(yàn)組的侵襲遷移能力明顯低于對(duì)照組，有非常顯著性差異(P<0.01)。 12G5對(duì)人胃癌細(xì)胞株SCG7901有細(xì)胞增殖抑制作用，經(jīng)12G5處理SCG7901細(xì)胞后出現(xiàn)細(xì)胞生存率明顯低于對(duì)照組(P<0.01)，且隨時(shí)間的延長(zhǎng)與對(duì)照組比較抑制增強(qiáng)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的

4、凋亡率，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的凋亡率明顯高于對(duì)照組，差異具有顯著性意義(P<0.01)。檢測(cè)結(jié)果顯示胃癌細(xì)胞株SCG7901存在VEGF165mRNA、NRP-1mRNA、CXCR4mRNA及蛋白的表達(dá)，12G5處理細(xì)胞后，實(shí)驗(yàn)組的CXCR4mRNA及蛋白水平較對(duì)照組顯著下降(P<0.01)。 結(jié)論：抗CXCR4單克隆抗體12G5一方面可能通過下調(diào)CXCR4的表達(dá)減少了與其配體SDF-1的結(jié)合；另一方面可能直接阻斷