成骨細(xì)胞膜片的構(gòu)建及其生物學(xué)研究.pdf

1、目的：探討利用大鼠成骨細(xì)胞在體外構(gòu)建具有一定機(jī)械強(qiáng)度細(xì)胞膜片的可行性；探討構(gòu)建膜片對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)活性和成骨性的影響。為無支架細(xì)胞膜片骨組織工程研究提供一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：原代培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，通過形態(tài)學(xué)觀察，堿性磷酸酶染色，茜素紅染色進(jìn)行成骨細(xì)胞鑒定；在50μL/ml抗壞血酸的培養(yǎng)基中，高密度連續(xù)培養(yǎng)，構(gòu)建成骨細(xì)胞膜片；倒置顯微鏡、HE染色、掃描電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察檢測(cè)；成骨細(xì)胞接種后，實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中添加50μL/ml抗壞血

2、酸，對(duì)照組常規(guī)培養(yǎng)，分別于1周，2周，3周行M TT檢測(cè)，組織學(xué)厚度測(cè)量分析，堿性磷酸酶(ALP)活性測(cè)定，Real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因COL、OCN表達(dá)情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，a=0.05,p<0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：原代培養(yǎng)的成骨細(xì)胞形態(tài)觀察、堿性磷酸酶、茜素紅染色鑒定符合成骨細(xì)胞特性。通過連續(xù)培養(yǎng)后機(jī)械刮取的方法獲得成骨細(xì)胞膜片。膜片測(cè)量厚度結(jié)果顯示：第1周至第2周是膜片厚度增加最顯著的時(shí)

3、間段，平均厚度可達(dá)38.4±2.1μm。MTT結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)1周，2周后，細(xì)胞增殖率明顯高于對(duì)照組，且細(xì)胞增殖率隨時(shí)間的增加而上升。3周后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增值率低于對(duì)照組。ALP結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組ALP明顯高于對(duì)照組，第2周相對(duì)于第1周酶活性降低?；驒z測(cè)結(jié)果提示：實(shí)驗(yàn)組成骨細(xì)胞內(nèi)COL、OC基因表達(dá)高于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組間
　　結(jié)論：抗壞血酸誘導(dǎo)，高密度接種，連續(xù)培養(yǎng)可以構(gòu)建出成骨細(xì)胞膜片；抗壞酸酸促進(jìn)細(xì)胞增殖，促進(jìn)堿性磷酸酶分泌，